Анализ крови на фагоцитоз что это

Анализ крови на фагоцитоз что это


8.Определение фагоцитарного числа, фагоцитарного индекса, прямой и нагрузочный нст-тест, их интерпретация.

Фагоцитарный показатель фиксирует среднее количество микробов, которое поглотила одна фагоцитирующая клетка (фагоцит), соответственно фагоцитарное число (ФЧ) отображает данное количество. Формула фагоцитарного числа применяется в самых различных областяхдиагностирования, в частности, когда необходимо проверить функциональную активность кровяных лейкоцитов, для чего применяют специальные тесты. Фагоцитарный индекс отражает переваривающую способность лейкоцитов, которые способны поглощать ту или иную тестовую микробную культуру. По поглотительной способности можно сделать вывод об активности фагоцитоза в организме. Обычно для этих целей используют определенные штаммы стафилококка. Наиболее информативно использование стафилококка штамма 9198.

Фагоцитарный индекс является одним из показателей, которые определяют при выявлении фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови. Оценка функции фагоцитарных клеток имеет большое диагностическое значение при инфекционных заболеваниях. Главными фагоцитами, имеющими наибольшее значение в противоинфекционном иммунитете, считаются нейтрофилы, моноциты/макрофаги и незрелые дендритные клетки. Проводятся 2 разновидности теста: спонтанный НСТ-тест и стимулированный НСТ-тест.

Иммуноферментный анализ (сокращённо ИФА, англ.enzymelinked immunosorbent assay, ELISA) — лабораторный иммунологический метод качественного или количественного определения различных соединений, макромолекул, вирусов и пр., в основе которого лежит специфическая реакция антиген-антитело. Выявление образовавшегося комплекса проводят с использованием фермента в качестве метки для регистрации сигнала. Примером неконкурентного формата ИФА является «сэндвич»-метод. К носителю с иммобилизованными антителами добавляют раствор, содержащий анализируемый антиген. В процессе инкубации на первой стадии на твердой фазе образуется комплекс антиген-антитело. Затем носитель отмывают от несвязавшихся компонентов и добавляют меченные ферментом специфические антитела. «Сэндвич»-метод может быть использован для анализа только тех антигенов, на поверхности которых существуют, по крайней мере, две антигенные детерминанты. На этом формате основано большое количество тест-систем для иммуноферментной диагностики различных инфекций:

ВИЧ-инфекция,вирусные гепатиты,цитомегаловирусная, герпесная, токсоплазменная и другие инфекции. Среди конкурентных схем твердофазного ИФА существует два основных формата:Прямой конкурентный формат ИФА использует иммобилизованые на твердой фазе специфические антитела, а меченый ферментом и немеченыйантигенконкурируют за связь с иммобилизованнымантителом. В непрямом конкурентном формате ИФА используются меченные ферментом антитела (специфические или вторичные) и иммобилизованный на твердой фазе конъюгат антиген-белок-носитель. Как любые иммунохимические методы анализа, ИФА может давать ложноположительные и ложноотрицательные результаты. Например, ложноположительные результаты при определении антител к различным инфекциям могут возникнут за счёт ревматоидного фактора, представляющего собой иммуноглобулин M против собственных иммуноглобулинов G человека; за счёт антител, образующихся при различных системных заболеваниях, нарушениях обмена или приёме лекарственных препаратов; у новорождённых такие ложноположительные реакции могут возникать за счёт образования в организме ребёнка M-антител к иммуноглобулину G матери. Помимо этого, причиной ложнопололожительных результатов может быть синдром поликлональной активации

источник

Фагоцитоз — поглощение клеткой крупных частиц, видимых в микроскоп (например, микроорганизмов, крупных вирусов, повреждённых тел клеток и т.д.). Процесс фагоцитоза можно подразделить на две фазы. В первой фазе частицы связываются на поверхности мембраны. Во второй фазе происходят собственно поглощение частицы и её дальнейшее разрушение. Различают две основные группы клеток фагоцитов — моно-нуклеарные и полинуклеарные. Полинуклеарные нейтрофилы составляют

первую линию защиты от проникновения в организм разнообразных бактерий, грибов и простейших. Они уничтожают повреждённые и погибшие клетки, участвуют в процессе удаления старых эритроцитов и очистки раневой поверхности.

Изучение показателей фагоцитоза имеет значение в комплексном анализе и диагностике иммунодефицитных состояний: часто рецидивирующих гнойно-воспалительных процессах, длительно не заживающих ран, склонности к послеоперационным осложнениям. Исследование системы фагоцитоза помогает в диагностике вторичных иммунодефицитных состояний, вызванных лекарственной терапией. Наиболее информативным для оценки активности фагоцитоза считают фагоцитарное число, количество активных фагоцитов и индекс завершённости фагоцитоза.

Фагоцитарная активность нейтрофилов

Параметры, характеризующие состояние фагоцитоза.

■ Фагоцитарное число : норма — 5-10 микробных частиц. Фагоцитарное число — среднее количество микробов, поглощённых одним нейтрофи-лом крови. Характеризует поглотительную способность нейтрофилов.

■ Фагоцитарная ёмкость крови: норма — 12,5-25х10 9 на 1 л крови. Фагоцитарная ёмкость крови — количество микробов, которое могут поглотить нейтрофилы 1 л крови.

■ Фагоцитарный показатель: норма 65-95%. Фагоцитарный показатель — относительное количество нейтрофилов (выраженное в процентах), участвующих в фагоцитозе.

■ Количество активных фагоцитов: норма — 1,6-5,0х10 9 в 1 л крови. Количество активных фагоцитов — абсолютное количество фагоцитирующих нейтрофилов в 1 л крови.

■ Индекс завершённости фагоцитоза: норма — более 1. Индекс завершенности фагоцитоза отражает переваривающую способность фагоцитов.

Фагоцитарная активность нейтрофилов обычно повышается в начале развития воспалительного процесса. Её снижение ведёт к хронизации воспалительного процесса и поддержанию аутоиммунного процесса, так как при этом нарушается функция разрушения и выведения иммунных комплексов из организма.

Заболевания и состояния, при которых изменяется фагоцитарная активность нейтрофилов, представлены в табл..

Таблица Заболевания и состояния, при которых изменяется фагоцитарная активность нейтрофилов

Таблица Заболевания и состояния, при которых изменяется фагоцитарная активность нейтрофилов

В норме у взрослых количество НСТ-положительных нейтрофилов составляет до 10%.

Спонтанный тест с НСТ (нитросиний тетразолий) позволяет оценить состояние кислородзависимого механизма бактерицидности фагоцитов (гранулоцитов) крови in vitro. Он характеризует состояние и степень активации внутриклеточной НАДФ-Н-оксидазной антибактериальной системы. Принцип метода основан на восстановлении поглощённого фагоцитом растворимого красителя НСТ в нерастворимый диформазан под влиянием супероксиданиона (предназначен для внутриклеточного уничтожения инфекционного агента после его поглощения), образующегося в НАДФ-Н-оксидазной реакции. Показатели НСТ-теста повышаются в начальный период острых бактериальных инфекций, тогда как при подос-тром и хроническом течении инфекционного процесса они снижаются. Санация организма от возбудителя сопровождается нормализацией показателя. Резкое снижение свидетельствует о декомпенсации противо-инфекционной защиты и считается прогностически неблагоприятным признаком.

Тест с НСТ играет важную роль в диагностике хронических грануле-матозных заболеваний, которые характеризуются наличием дефектов в НАДФ-Н-оксидазном комплексе. Для пациентов с хроническими гра-нулематозными заболеваниями характерно наличие рецидивирующих инфекций (пневмония, лимфаденит, абсцессы лёгких, печени, кожи), вызываемых Staphylococcus aureus, Klebsiella spp., Candida albicans, Salmonella spp., Escherichia coli, Aspergillus spp., Pseudomonas cepacia, Mycobacterium spp. и Pneumocystis carinii.

Нейтрофилы у пациентов с хроническими гранулематозными заболеваниями имеют нормальную фагоцитарную функцию, но вследствие дефекта в НАДФ-Н-оксидазном комплексе не способны уничтожать микроорганизмы. Наследственные дефекты НАДФ-Н-оксидазного комплекса в большинстве случаев сцеплены с хромосомой X, реже аутосомно-ре-цессивные.

Снижение спонтанного теста с НСТ характерно для хронизации воспалительного процесса, врождённых дефектов фагоцитарной системы, вторичных и первичных иммунодефицитов, ВИЧ-инфекции, злокачественных новообразований, тяжёлых ожогов, травм, стрессов, недостаточности питания, лечения цитостатиками и иммунодепрессантами, воздействия ионизирующего излучения.

Повышение спонтанного теста с НСТ отмечают при антигенном раздражении вследствие бактериального воспаления (продромальный период, период острого проявления инфекции при нормальной активности фагоцитоза), хроническом гранулематозе, лейкоцитозе, усилении антите-лозависимой цитотоксичности фагоцитов, аутоаллергических заболеваниях, аллергии.

Активированный тест с НСТ

В норме у взрослых количество НСТ-положительных нейтрофилов составляет 40-80%.

Активированный тест с НСТ позволяет оценить функциональный резерв кислородзависимого механизма бактерицидности фагоцитов. Тест используют для выявления резервных возможностей внутриклеточных систем фагоцитов. При сохранённой внутриклеточной антибактериальной активности в фагоцитах происходит резкое возрастание количества формазан-положительных нейтрофилов после их стимуляции латексом. Снижение показателей активированного НСТ-теста нейтрофилов ниже 40% и моноцитов ниже 87% свидетельствует о недостаточности фагоцитоза.

источник

Фагоцитоз – это один из жизненно важных механизмов работы нашего иммунитета. Если бы не полимикробный фагоцитоз, мы бы были практически беззащитны против бесчисленного количества бактерий, грибков, вирусов и паразитов, которые ежедневно нас атакуют. Кстати, за сутки мы несколько сотен раз подвергаемся реальному риску заразиться каким-нибудь инфекционным или паразитарным заболеванием, и только иммунная система нас от этого и уберегает.

Фагоцитоз – важное звено защиты здоровья. Но известно, что он может протекать с различной степенью эффективности. От чего это зависит, и как можно определить показатели фагоцитоза, отражающие его «качество»?

Фактически первое, от чего зависит прочность защиты – это сам микроб, который «нападает» на организм. Некоторые микроорганизмы имеют особые свойства. Благодаря этим свойствам клетки, которые участвуют в фагоцитозе, не могут их уничтожить.

Например, возбудители токсоплазмоза и туберкулеза поглощаются фагоцитами, но при этом продолжают развиваться внутри них безо всякого вреда для себя. Это достигается потому, что они тормозят фагоцитоз: мембрана микробов выделяет вещества, которые не позволяют фагоциту воздействовать на них ферментами его лизосом.

Некоторые стрептококки, стафилококки, а также гонококки тоже могут припеваючи жить и даже размножаться внутри фагоцитов. Эти микробы вырабатывают соединения, обезвреживающие вышеупомянутые ферменты.

Хламидии и риккетсии не только обосновываются внутри фагоцита, но и устанавливают там свои порядки. Так, они растворяют «мешок», в который их «ловит» фагоцит, и переходят в цитоплазму клетки. Там они существуют, используя ресурсы фагоцита для своего питания.

Наконец, вирусы вообще труднодостижимы для фагоцитоза: многие из них сразу же проникают в ядро клетки, встраиваются в ее геном и начинают управлять ее работой, неуязвимые для иммунной защиты и оттого очень опасные для здоровья.

Таким образом, о возможности неэффективного фагоцитоза можно судить уже по тому, чем именно человек болеет.

В фагоцитозе участвуют главным образом две разновидности клеток: нейтрофилы и макрофаги. Поэтому, чтобы узнать, насколько хорошо протекает фагоцитоз в организме человека, врачи изучают показатели преимущественно этих клеток. Ниже приведен перечень анализов, позволяющих узнать, насколько у пациента активен полимикробный фагоцитоз.

1. Общий анализ крови с определением количества нейтрофилов.

2. Определение фагоцитарного числа, или фагоцитарной активности. Для этого из образца крови извлекают нейтрофилы и наблюдают за тем, как они осуществляют процесс фагоцитоза. В качестве «жертв» им предлагают стафилококков, кусочки латекса, грибки Candida. Число профагоцитировавших нейтрофилов делят на их общее количество, и получается искомый показатель фагоцитоза.

3. Подсчет фагоцитарного индекса. Как известно, каждый фагоцит на протяжении жизни может уничтожить несколько вредоносных объектов. При подсчете фагоцитарного индекса лаборанты считают, сколько бактерий было захвачено одним фагоцитом. По «прожорливости» фагоцитов делают вывод о том, насколько хорошо осуществляется защита организма.

4. Определение опсонофагоцитарного индекса. Опсонины – это вещества, усиливающие фагоцитоз: мембрана фагоцитов лучше реагирует на присутствие вредоносных частиц в организме, а процесс их поглощения проходит активнее, если в крови много опсонинов. Опсонофагоцитарный индекс определяют соотношением фагоцитарного индекса сыворотки пациента и такого же индекса нормальной сыворотки. Чем индекс выше, тем лучше идет фагоцитоз.

5. Определение скорости перемещения фагоцитов к попавшим в организм вредоносным частицам проводится особой реакцией торможения миграции лейкоцитов.

Есть и другие анализы, позволяющие определить возможности фагоцитоза. Не будем утомлять читателей подробностями, скажем лишь, что получение информации о качестве фагоцитоза возможно, и для этого следует обратиться к иммунологу, который расскажет, какие конкретно исследования надо сделать.

Если есть основания полагать, что у вас слабый иммунитет, или если вы точно об этом знаете по результатам проведенных анализов, вам следует начать прием препаратов, которые благоприятно подействуют на эффективность фагоцитоза. Лучшим из них на сегодняшний день является иммуномодулятор Трансфер Фактор. Его обучающее воздействие на иммунитет, которое реализуется благодаря присутствию в средстве информационных молекул, позволяет нормализовать все протекающие в иммунной системе процессы. Прием Трансфер Фактора – это необходимая мера для улучшения качества всех звеньев работы иммунитета, а значит, залог сохранения и укрепления здоровья в целом.

источник

Многие годы безуспешно боретесь с ГИПЕРТОНИЕЙ?

Глава Института: «Вы будете поражены, насколько просто можно вылечить гипертонию принимая каждый день.

Индекс распределения эритроцитов понижен – что это значит? Важным показателем общего анализа крови, является – RDW. Он позволяет определить объем, форму и размер эритроцитов. Кровяные тельца отвечают за распределение кислорода по организму, а также выводят углекислый газ и токсины. Если rdw снижен – это говорит о патологическом отклонении органа или системы.

Поэтому важно понимать, как поступать, когда индекс распределения эритроцитов понижен, и что это значит для состояния здоровья. Некоторые болезни можно диагностировать с помощью индекса RDW.

Для лечения гипертонии наши читатели успешно используют ReCardio. Видя, такую популярность этого средства мы решили предложить его и вашему вниманию.
Подробнее здесь…

В основе крови находятся клетки, которые вырабатываются костным мозгом. Различают три вида клеток: кровяные, белые и красные тельца. Именно красные клетки называются эритроцитами, их состояние определяют с помощью анализа крови.

У здоровых людей клетки одинаковы по объему, форме и цвету. Показатель анализа может немного колебаться, этот коэффициент специалисты называют – ширина распределения эритроцитов по объему.

Существует два вида этого показателя:

  • rdw cv, показывает распределение эритроцитов по объему в процентном соотношении;
  • rdw sd – позволяет оценить степень отклонения.

Патологическим отклонением от нормы размера эритроцитов называют анизоцитозом.

Анализ крови проводят специальным аппаратом, коэффициент определяется в процентах. Нормальный показатель RDW у взрослых людей колеблется от 11 до 15%, любое отклонение свидетельствует о патологическом процессе в организме. Повышенный индекс означает, что эритроциты отличаются между собой по размеру, их жизнедеятельность сокращается. Если показатель распределения эритроцитов по объему понижен, чаще это свидетельствует о малокровии разной степени.

Правильно расшифровать анализ крови, установить причину болезни сможет только опытный доктор. При нарушениях нормы, пациенту рекомендуют дополнительное исследование, которое позволит определить причину заболевания.

Сниженный результат встречается очень редко и чаще больного направляют на повторный забор крови. Ведь гематологический прибор может показывать только высокий или нормальный уровень.

Такой анализ крови чаще назначают на первом этапе постановки диагноза совместно с другими показателями.

Забор крови проводят при помещении пациента в медицинское учреждение или перед оперативным вмешательством.

А также анализ крови регулярно проводят для оценки состояния больного в динамике, чтобы определить эффективность лечения.

Перед процедурой важно придерживаться рекомендаций специалистов, чтобы исключить ложноположительный результат. Существует много факторов, которые влияют на определение RDW.

Забор крови проводят утром, с 8 до 11 часов, перед манипуляцией нельзя употреблять еду, кофе, чай, сигареты. После последнего приема пищи должно пройти не менее десяти часов. Нельзя нервничать перед процедурой.

Взяв образец крови, специалист помещает его в центрифугу, это позволит отделить жидкость от клеток. Затем полученный образец помещают в анализатор, где аппаратура самостоятельно проводит подсчет клеток, их состояние и выдает заключение.

Доктор получает результат в виде гистограммы. При положительном результате обязательно манипуляцию проводят повторно, чтобы исключить ложный показатель.

Низкий коэффициент индекса распределения эритроцитов, может наблюдать по следующим причинам:

  1. Слишком сильная кровопотеря при травмах или других патологиях. Особо опасным является маточная или желудочная внутренняя кровопотеря. В таких случаях, мало шансов на спасение больного человека.
  2. Оперативное вмешательство, при котором удаляют орган.
  3. Нарушения в обмене веществ, непереваренная пища начинает бродить в желудке, что вызывает гниение.
  4. Гормональный сбой, чаще наблюдается у женщин.
  5. Дефицит витаминов, железа.
  6. Патологические заболевания крови, при которых эритроциты теряют свою биологическую функцию.

Если у человека низкий показатель индекса распределения эритроцитов, то проявляются характерные симптомы анемии:

  • больной постоянно чувствует вялость, быстро устает без физической нагрузки;
  • головокружение;
  • постоянная утомляемость, снижается работоспособность;
  • одышка, сухой кашель;
  • повышенное давление;
  • учащенное сердцебиение;

Такие негативные проявления наблюдаются из-за нарушения биологического процесса. Кровяные клетки становятся малого размера и плохо разносят кислород по организму. В первую очередь страдает нервная система, которая отвечает за импульсы.

При первых недомоганиях, необходимо проконсультироваться с доктором. Специалист назначит анализ крови, проведет дополнительное исследование, что поможет назначить адекватное лечение.

Чаще у пациентов наблюдается повышенное значение ширины распределения эритроцитов по объему. Такое отклонение – анизоцитоз, не является самостоятельной болезнью, чаще это признак патологического процесса.

При таком отклонении увеличивается селезенка, что вызывает нарушение функциональности других органов.

Основные причины повышения RDW:

  • серьезные проблемы с печенью;
  • недостаток витаминов группы A и В12 в организме;
  • дефицит железа и фолиевой кислоты;
  • злокачественная опухоль;
  • злоупотребление алкогольными напитками;
  • лейкоцитоз.

А также патологическое повышение наблюдается при отравлении химическими веществами, болезни сердечно-сосудистой системы.

Повышение коэффициента RDW приводит к желтоватому цвету лица из-за нарушения работы печени, селезенки.

У человека наблюдается упадок сил, быстрая утомляемость, повышена потливость. Из-за нарушений в нервной системе у больного резко меняется настроение, возбужденное состояние сменяется равнодушием и отчужденностью.

Наблюдается одышка, учащается сердцебиение, меняется цвет ногтей и глазных яблок.

Чтобы устранить проблемы, важно установить причину отклонения. Кроме, медикаментозного лечения необходимо откорректировать питание, образ жизни.

Если соблюдать все предписания докторов, можно нормализовать состояние красных клеток, их нормальное функционирование. Нужно принимать комплекс витаминов, содержащих B12, фолиевую кислоту, следить за гемоглобином.

Значение показателя ниже нормы наблюдается крайне редко, и предотвратить его довольно трудно. Важно регулярно проходить профилактические осмотры, следить за общим состоянием здоровья. Чтобы избежать ложных результатов анализа крови, необходимо соблюдать рекомендации доктора.

Но важно придерживаться элементарных профилактических правил, которые советуют врачи:

  • правильно и сбалансировано питаться, в рационе должны присутствовать свежие овощи, фрукты;
  • совершать пешие прогулки на свежем воздухе;
  • вести активную жизнь;
  • заниматься гимнастикой;
  • при первых симптомах недомогания обращаться в медицинское учреждение.

Многие серьезные заболевания проходят скрыто и не проявляются выраженной симптоматикой. Только при полном исследовании можно выявить патологическое отклонение в организме. Определив причину нарушения, доктор сможет правильно назначить медикаментозную терапию. Самолечение только усугубит ситуацию, часто упущенное время приводит к серьезным последствиям.

источник

Другие
название фактора влияние на Индекс завершенности фагоцитоза
Хронизация воспалительного процесса Понижение
Недостаточность фагоцитоза Понижение
Недостаточность питания (дефицит белков и калорий) Понижение
Кишечные и почечные синдромы с потерей белка Понижение
Стресс Понижение
Травмы Понижение
Ожоги (тяжелые) Понижение
Новообразования Понижение
Вторичные и первичные иммунодефициты Понижение
Ионизирующее излучение Понижение
Недостаток Ig, комплемента Понижение
Реакции гипречувствительности III типа Понижение
Коллагенозы Понижение
Врожденные дефекты фагоцитарной системы Понижение
Хронические бактериальные и вирусные инфекции Понижение
Усиление антителозависимой цитотоксичности и реакции на донорский трансплантат Повышение
Аутоиммунные заболевания Повышение
Аллергия Повышение
Лейкоцитоз Повышение
Антигенное раздражение вследствие бактериального воспаления при нормальной активности фагоцитоза Повышение
Иммунодепрессанты Понижение
Цитостатики Понижение

Медицинский портал MedElement — это облачные сервисы, мобильные приложения и электронные справочники для врачей и пациентов.
Наши проекты могут помочь вам!

источник

Показатели фагоцитоза (фагоцитарная активность нейтрофилов) – метод диагностики иммунодефицитных состояний. Отражает процесс захвата и переваривания различных чужеродных агентов фагоцитирующими клетками.

Процесс фагоцитоза осуществляется клетками иммунной системы — нейтрофилами (полиморфноядерные лейкоциты, макрофаги, дендритные клетки) и направлен на уничтожение микроорганизмов. После распознавания чужеродной частицы она поглощается с формированием фагосомы/фаголизосомы и уничтожается с участием активных форм кислорода (перикиси кислорода, гипохлорита). Процесс образования активных форм кислорода происходит при участии ферментов, ключевыми являются — миелопероксидаза и оксидаза-NADH зависимая.
Повышение фагоцитарной активности повышено, как правило, в начале развития болезни, а снижение приводит к хронизации воспалительных процессов.
Результаты предоставляются следующими показателями:
1. Фагоцитирующие гранулоциты (ФГ) и расчет индекса фагоцитоза (ФГ).
2. Фагоцитирующие моноциты (ФМ) и расчет индекса фагоцитоза (ФМ). Специальной подготовки не требуется. Забор крови желательно провести утром, натощак. Забор крови проводят в пробирку с гепарином. Перемешивают, но не встряхивают. 1. Фагоцитирующие гранулоциты (ФГ) в норме — 95-99%. Индекс фагоцитоза (ФГ) — 800-1800.
2. Фагоцитирующие моноциты (ФМ) в норме 65 — 93%. Индекс фагоцитоза (ФМ) — 300-900. Исследование целесообразно проводить при следующих состояниях:

1. Сепсис.
2. Инфекции верхних дыхательных путей (бронхиты, синуситы, отит).
3. Хронические инфекционные процессы (абсцессы, фурункулез, частые грибковые поражения, поражение кожи).
4.Диагностика первичных иммунодефицитов (дефекты глутатион-синтазы и миелопероксидазы, синдром Чедиака-Хигаси — аутосомно-рецессивное заболевание, проявляющееся частыми инфекциями различной этиологии. Результат нарушения развития лейкоцитов со снижением пероксидазной активности).
5. Оценка при вторичных иммунодефицитах (прием иммунодепрессантов, цитостатиков, кортикостероидов).
6. Менингит.
7. Остеомиелит.
Повышение.

1. Воспаление при бактериальной инфекци.
2. Аллергия.
3.Лейкоцитоз.

1. Хронические бактериальные и вирусные заболевания.
2. Первичные и вторичные иммунодефицитные состояния.
3. Прием иммунодепрессантов и цитостатиков.
4. Онкологические заболевания.
5. Ожоговая болезнь.
6. Ионизирующая радиация.
7. Синдром Чедиака-Хигаси.
8. Врожденные аномалии фагоцитарной системы.
9. Недостаточность комплемента, иммуноглобулинов.
10. Системная красная волчанка и другие коллагенозы.

Процесс фагоцитоза осуществляется клетками иммунной системы — нейтрофилами (полиморфноядерные лейкоциты, макрофаги, дендритные клетки) и направлен на уничтожение микроорганизмов. После распознавания чужеродной частицы она поглощается с формированием фагосомы/фаголизосомы и уничтожается с участием активных форм кислорода (перикиси кислорода, гипохлорита). Процесс образования активных форм кислорода происходит при участии ферментов, ключевыми являются — миелопероксидаза и оксидаза-NADH зависимая.

Повышение фагоцитарной активности повышено, как правило, в начале развития болезни, а снижение приводит к хронизации воспалительных процессов.

Результаты предоставляются следующими показателями:

1. Фагоцитирующие гранулоциты (ФГ) и расчет индекса фагоцитоза (ФГ).

2. Фагоцитирующие моноциты (ФМ) и расчет индекса фагоцитоза (ФМ).

источник

8.Определение фагоцитарного числа, фагоцитарного индекса, прямой и нагрузочный нст-тест, их интерпретация.

Фагоцитарный показатель фиксирует среднее количество микробов, которое поглотила одна фагоцитирующая клетка (фагоцит), соответственно фагоцитарное число (ФЧ) отображает данное количество. Формула фагоцитарного числа применяется в самых различных областяхдиагностирования, в частности, когда необходимо проверить функциональную активность кровяных лейкоцитов, для чего применяют специальные тесты. Фагоцитарный индекс отражает переваривающую способность лейкоцитов, которые способны поглощать ту или иную тестовую микробную культуру. По поглотительной способности можно сделать вывод об активности фагоцитоза в организме. Обычно для этих целей используют определенные штаммы стафилококка. Наиболее информативно использование стафилококка штамма 9198.

Фагоцитарный индекс является одним из показателей, которые определяют при выявлении фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови. Оценка функции фагоцитарных клеток имеет большое диагностическое значение при инфекционных заболеваниях. Главными фагоцитами, имеющими наибольшее значение в противоинфекционном иммунитете, считаются нейтрофилы, моноциты/макрофаги и незрелые дендритные клетки. Проводятся 2 разновидности теста: спонтанный НСТ-тест и стимулированный НСТ-тест.

Иммуноферментный анализ (сокращённо ИФА, англ.enzymelinked immunosorbent assay, ELISA) — лабораторный иммунологический метод качественного или количественного определения различных соединений, макромолекул, вирусов и пр., в основе которого лежит специфическая реакция антиген-антитело. Выявление образовавшегося комплекса проводят с использованием фермента в качестве метки для регистрации сигнала. Примером неконкурентного формата ИФА является «сэндвич»-метод. К носителю с иммобилизованными антителами добавляют раствор, содержащий анализируемый антиген. В процессе инкубации на первой стадии на твердой фазе образуется комплекс антиген-антитело. Затем носитель отмывают от несвязавшихся компонентов и добавляют меченные ферментом специфические антитела. «Сэндвич»-метод может быть использован для анализа только тех антигенов, на поверхности которых существуют, по крайней мере, две антигенные детерминанты. На этом формате основано большое количество тест-систем для иммуноферментной диагностики различных инфекций:

ВИЧ-инфекция,вирусные гепатиты,цитомегаловирусная, герпесная, токсоплазменная и другие инфекции. Среди конкурентных схем твердофазного ИФА существует два основных формата:Прямой конкурентный формат ИФА использует иммобилизованые на твердой фазе специфические антитела, а меченый ферментом и немеченыйантигенконкурируют за связь с иммобилизованнымантителом. В непрямом конкурентном формате ИФА используются меченные ферментом антитела (специфические или вторичные) и иммобилизованный на твердой фазе конъюгат антиген-белок-носитель. Как любые иммунохимические методы анализа, ИФА может давать ложноположительные и ложноотрицательные результаты. Например, ложноположительные результаты при определении антител к различным инфекциям могут возникнут за счёт ревматоидного фактора, представляющего собой иммуноглобулин M против собственных иммуноглобулинов G человека; за счёт антител, образующихся при различных системных заболеваниях, нарушениях обмена или приёме лекарственных препаратов; у новорождённых такие ложноположительные реакции могут возникать за счёт образования в организме ребёнка M-антител к иммуноглобулину G матери. Помимо этого, причиной ложнопололожительных результатов может быть синдром поликлональной активации

источник

В-лимфоциты (ЕАС_РОК) 27% 0,42 • 10 9 /л

Для выделения В-лимфоцитов из общей популяции лимфоцитов используют модификацию метода розеткообразования (с помощью которого в прошлом выпуске рассылки мы оценивали количество Т-клеток). Называется этот метод ЕАС-розеткообразование.

Суть метода состоит в следующем. На поверхности В-лимфоцитов имеется рецептор для С3-компонента комплемента. Комплемент — это группа белков сыворотки крови, служащая для уничтожения бактерий. Для выявления рецептора для С3-компонента комплемента исследуемые лимфоциты смешивают со специально обработанными эритроцитами быка (их сначала обрабатывают антиэритроцитарными антителами, а затем свежезамороженной сывороткой мыши — источником комплемента). После совместной инкубации лейкоцитов и эритроцитов В-клетки образуют фигуры розеток.

Норма: относительное содержание 10 — 30 %
абсолютное содржание 100 — 900 кл/мкл или 0,1 — 0,9 • 10 9 /л

Причины повышения содержания В-лимфоцитов:
— инфекции
— аутоиммунные заболевания
— аллергические заболевания
— лимфолейкозы
— миеломная болезнь.

Причины снижения содержания В-лимфоцитов:
— иммунодефициты
— опухоли.

В данном анализе показатель В-клеточного звена иммунитета соответствует норме, относительное содержание В-клеток приближается к верхней границе нормы, причиной этого является снижение содержания Т-лимфоцитов.

О-лимфоциты 50% 0,76 • 10 9 /л

О-лимфоциты или нулевые лимфоциты — это лимфоциты, не имеющие рецепторов характерных для В- и Т-лимфоцитов. Среди них есть NK-клетки, молодые (незрелые) лимфоциты.

По всей вероятности, содержание О-лимфоцитов в данном анализе находится в пределах нормы.

Для определения функционального состояния лимфоцитов исследуют способность этих клеток размножаться в ответ на введение митогенов (веществ, стимулирующих размножение), а также синтез антител.

Реакция бласттрансформации лимфоцитов (РБТЛ) с ФГА 69% 1,07 • 10 9 /л
Спонтанная РБТЛ 1% 0,01 • 10 9 /л

Некоторые вещества оказывают на лейкоциты млекопитающих митогенное действие; среди них — фитогемагглютинин (ФГА). Получают ФГА из семян фасоли.

Для проведения исследования лейкоциты, выделенные из крови методом центрифугирования (во время вращения центрифуги клетки крови оседают на ее дно слоями в зависимости от их массы), культивируют (выращивают) в присутствии ФГА в течение 72 часов.
Далее из клеточной культуры готовят мазки, фиксируют их в метаноле (метиловый спирт) и окрашивают так же, как мазки крови. В световом микроскопе с иммерсионной системой (таким микроскопом обычно смотрят мазки, срезы тканей) определяют процент бластов (молодых клеток) по отношению к общему количеству лимфоцитов.

В зависимости от качества использованных реактивов, а также от условий культивирования результаты реакции могут быть различными. Большое значение имеет качество сыворотки, добавляемой к питательной среде. Поэтому врачу необходимо выяснить в лаборатории, в которой проводилось исследование, какие цифры считать нормой.
В Новгородской лаборатории клинической иммунологии «Хелпер» это исследование не проводится.

Снижение пролиферативного ответа на ФГА свидетельствует о наличии иммунодефицита, однако причины его могут быть различными.

Повышение пролиферативного ответа на ФГА может свидетельствовать о наличии инфекции или какой-либо аутоиммунной патологии.

Фагоцитарный индекс 62% (норма 40-80%)

Фагоциты (в данном случае — нейтрофилы) поедают микроорганизмы. Фагоцитарную активность оценивают с помощью методов, позволяющих определить долю клеток, способных формировать внутри себя «пищеварительный пузырек» — фагосому. «Поедаемым» материалом могут быть частицы латекса, эритроциты, тест-культуры бактерий (например, кишечной палочки).

В данном случае под понятием «фагоцитарный индекс» скорее всего подразумевается фагоцитоз с латексом.

В данном анализе фагоцитарный индекс соответствует норме.

Для оценки «переваривающей» способности нейтрофилов используют НСТ-тест (НСТ — это нитросиний тетразолий). Поглощение фагоцитами микробов сопровождается повышением потребления кислорода этими клетками и образованием перекиси водорода и свободных радикалов кислорода (те и другие можно объединить под названием — активные формы кислорода — АФК). Суть реакции состоит втом, что нитросиний тетразолий в присутствии АФК окрашивается в синий цвет, а в отсутствии АФК остается бесцветным.

В данном анализе НСТ-тест соответствует норме.

Причины повышения фагоцитарной активности лейкоцитов:
— острые бактериальные инфекции.

Причины снижения фагоцитарной активности лейкоцитов:
— иммунодефициты врожденные
— хронические инфекции
— аутоиммунные заболевания
— аллергические заболевания
— вирусные инфекции
— СПИД

Иммуноглобулины — показатели в пределах нормы.

Причины повышения содержания Ig A:
— острые инфекции
— саркоидоз
— аутоиммунные заболевания с локализацией процесса в легких или в кишечнике
— Ig A нефропатия

Причины снижения содержания Ig A:
— хронические заболевания (особенно респираторного и желудочно-кишечного тракта
— нагноения
— туберкулез
— опухоли
— иммунодефициты.

Причины повышения содержания Ig M:
— бронхиальная астма
— инфекции (острые или обострения хронических
— аутоиммунные заболевания, особенно ревматоидный артрит.

Причины снижения содержания Ig M:
— иммунодефициты первичные и вторичные.

Норма для Ig G: 6,0 — 20,0 г/л

Причины повышения содержания Ig G:
— аллергии
— аутоиммунные заболевания.

Причины снижения содержания Ig G:
— иммунодефициты первичные и вторичные.

Норма для Ig E: 20 — 100 Ке/л

Содержание Ig E повышается при различных видах аллергии.

PS: нормы везде приводится для взрослых!

Мы обсудили основные параметры иммунограммы. Что же можно сказать о разбираемом анализе?

Абсолютное количество лимфоцитов 1,55 • 10 9 /л норма
Т-лимфоциты (Е-РОК) — 23% 0,36 • 10 9 /л снижено
Т-лимфоциты (Е-РОК) T-хелперы — 28% 0,43 • 10 9 /л снижено
В-лимфоциты (ЕАС_РОК) 27% 0,42 • 10 9 /л норма
О-лимфоциты 50% 0,76 • 10 9 /л норма
Реакция бласттрансформации лимфоцитов (РБТЛ) с ФГА 69% 1,07 • 10 9 /л ?
Спонтанная РБТЛ 1% 0,01 • 10 9 /л ?
Иммуноглобулин -показатели в пределах нормы норма
Фагоцитарный индекс 62% (норма 40-80%) норма
Фагоцитарный показатель 5,1 (норма 4-8) норма
НСТ -тест 17% (норма 10-30%) норма

Мы видим нарушение Т-клеточного звена иммунитета (снижение Т-лимфоцитов в общем, и Т-хелперов в частности). Скорее всего здесь имеет место легкое иммунодефицитное состояние, опять же, скорее всего, обусловленное хронической инфекции (наиболее частая причина). Более точный диагноз можно поставить, лишь тщательно собрав анамнез (расспросив больного) и проведя дальнейшее обследование.

Список литературы:

Клиническая иммунология. Руководство для врачей/Под ред. акад. РАМН Е.И. Соколова. — М.: Медицина, 1998. — 272 с.: ил.
Клиническая иммунология и аллергология. Под ред. Г. Лолора-младшего, Т. Фишера и Д. Адельмана. Пер. с англ. — М.: Практика, 2000. — 806 с.
В.Г. Галактионов. Иммунология: Учебник. — М.: Изд-во МГУ. 1998. — 480 с.

Анекдоты.
Несчастный случай: рабочий Иванов попал под пресс на заводе. Руководство завода думает, кого послать к его жене сообщить о несчастье. Решили послать Рабиновича.
Рабинович звонит в дверь, открывает жена Иванова.
Рабинович:
— Здесь проживает вдова Иванова?
Жена:
— Вообще-то, я не вдова!
Рабинович:
— А давайте с Вами поспорим!

источник

Исследование фагоцитарной активности лейкоцитов – анализ крови, который направлен на определение резервных возможностей нейтрофилов и моноцитов к выполнению их основной функции – поглощению и переработке чужеродных агентов. Тест выполняется в комплексе иммунограммы. Он показан пациентам с рецидивирующими и хроническими инфекциями, приобретенными и генетическими иммунодефицитными состояниями, аутоиммунными и онкологическими заболеваниями, перенесшим сложные операции, в том числе по трансплантации органов. Анализу подвергается цельная кровь. Исследование основано на оценке фагоцитоза бактерий с флуоресцентными метками. В норме фагоцитирующие гранулоциты составляют от 82 до 90% от общего количества, фагоцитирующие моноциты – от 75 до 85%. Готовность результатов – до 8 дней.

Исследование фагоцитарной активности лейкоцитов – анализ крови, который направлен на определение резервных возможностей нейтрофилов и моноцитов к выполнению их основной функции – поглощению и переработке чужеродных агентов. Тест выполняется в комплексе иммунограммы. Он показан пациентам с рецидивирующими и хроническими инфекциями, приобретенными и генетическими иммунодефицитными состояниями, аутоиммунными и онкологическими заболеваниями, перенесшим сложные операции, в том числе по трансплантации органов. Анализу подвергается цельная кровь. Исследование основано на оценке фагоцитоза бактерий с флуоресцентными метками. В норме фагоцитирующие гранулоциты составляют от 82 до 90% от общего количества, фагоцитирующие моноциты – от 75 до 85%. Готовность результатов – до 8 дней.

Фагоцитарная активность лейкоцитов – лабораторный показатель, который отражает процент нейтрофилов и моноцитов, способных к связыванию с патогенной микрофлорой и ее перевариванию. Фагоциты – клетки, которые защищают организм от развития инфекций. Они считаются компонентом врожденного иммунитета, в крови представлены двумя видами лейкоцитов – моноцитами и нейтрофилами. Моноциты являются крупными клетками – макрофагами. Они обладают выраженной способностью к поглощению, перерабатывают большие по размерам клетки и органические соединения. В месте воспаления они фагоцитируют бактерии, лейкоцитарную массу, пораженные клетки. В результате ткани очищаются и подготавливаются к регенерации. Нейтрофилы относятся к микрофагам, в отличие от моноцитов поглощают только небольшие клетки и органические компоненты. После переработки агентов нейтрофилы гибнут, высвобождают вещества, которые повреждают бактерии и грибки, усиливают приток иммунных клеток к очагу воспаления.

Анализ крови на фагоцитарную активность лейкоцитов позволяет оценить резерв моноцитов и нейтрофилов к перевариванию чужеродных агентов. Изменение характеристик фагоцитов отражает не только иммунологическую реактивность организма, но и особенности некоторых других процессов – белкового и углеводного обмена, наличие интоксикации и истощения организма, активность восстановления после заболеваний и т. д. Таки образом, анализ применяется не только в иммунологии и инфекционистике, но и в ревматологии, онкологии, хирургии. Результаты исследования отображаются как процент активных фагоцитов к их общему количеству. Выявление активных нейтрофилов и моноцитов производится с помощью бактерий с флуоресцентными метками. Биоматериалом для исследования является цельная кровь с гепарином.

Исследование фагоцитарной активности лейкоцитов показано при подозрении на врожденный или приобретенный иммунодефицит. Оно назначается при затяжных, хронических и рецидивирующих инфекционных заболеваниях – характерном признаке снижения иммунитета. Чаще всего на анализ направляются пациенты с пневмонией, синуситом, отитом, энтероколитом, кандидозом, циститом. Также о недостаточности иммунной защиты могут свидетельствовать длительно незаживающие раны, осложнения после операций. Поэтому анализ выполняется при подготовке к хирургическому вмешательству и при осложненном течении послеоперационного периода, при длительном восстановлении после травм и ожогов. К другим показаниям для данного исследования относятся аллергические, аутоиммунные и онкологические заболевания. Результаты позволяют оценить активность иммунной защиты (фагоцитоза) и ее роль в развитии болезни.

Анализ крови на фагоцитарную активность лейкоцитов дает возможность определить фактическую готовность организма к противостоянию инфекциям. Однако стоит помнить, что этот показатель изменяется под влиянием многих факторов. Так, активность моноцитов и нейтрофилов снижается после физической нагрузки и при умственном утомлении, а после приема калорийной пищи повышается. Еще одним ограничением анализа является то, что процедура исследования занимает до 8 рабочих дней, полученные результаты отражают состояние недельной давности.

Для исследования фагоцитарной активности лейкоцитов производится забор крови из вены. За день до анализа нужно исключить из рациона алкоголь, отменить спортивные тренировки и другие интенсивные физические нагрузки, избегать стрессовых ситуаций. Также необходимо проконсультироваться с врачом о влиянии принимаемых лекарств на результат исследования, возможно, некоторые препараты будут временно отменены. Процедура забора крови, как правило, производится с утра, после ночного периода голодания или через 4 часа после приема пищи.

Кровь берется из локтевой вены с помощью пункции, для исследования фагоцитарной активности лейкоцитов чаще всего используется метод оценки фагоцитоза бактерий с флуоресцентной меткой. Из крови путем центрифугирования и отмывания выделяют моноциты и нейтрофилы – исследуемый материал. Затем в образец вводят культуру люминесцентных бактерий, смесь ресуспендируют и инкубируют, по интенсивности люминесценции определяют количество лейкоцитов, фагоцитировавших бактерии. Результаты анализа подготавливаются в течение 7-8 рабочих дней. Фагоцитарная активность моноцитов и нейтрофилов может быть определена и другими методами, например, окрашиванием фагоцитировавших клеток (метод Романовского-Гимзы), по активности лизосомальных ферментов, производству цитокинов, присутствию катионных белков.

Результат анализа крови на фагоцитарную активность лейкоцитов выражается в процентах фагоцитирующих клеток от их общего количества. Значения нормы для гранулоцитов – от 82 до 90%, для моноцитов – от 75 до 85%. Эти показатели одинаковы для пациентов всех возрастов и обоих полов. Физиологическое снижение фагоцитоза может определяться во время беременности, после физической нагрузки, не соответствующей уровню подготовки, и после эмоционального стресса.

Повышение фагоцитарной активности лейкоцитов не имеет диагностической значимости, причиной могут стать острые инфекции. Активность моноцитов и нейтрофилов увеличивается относительно исходного уровня.

Причиной снижения фагоцитарной активности лейкоцитов часто являются вторичные иммунодефицитные состояния. Они проявляются рецидивирующими инфекционными и воспалительными процессами, незаживающими гнойными ранами, осложнениями после операций, паразитарными инвазиями. Снижение иммунной защиты может быть вызвано лучевым и химиотерапевтическим воздействием, применением лекарств (иммуносупрессоров, цитостатиков). Реже причиной снижения фагоцитарной активности лейкоцитов становятся первичные иммунодефицитные состояния. Они развиваются при наследственных дефектах фагоцитов – при хронической гранулематозной болезни, синдроме Чедиака-Стейнбринка-Хигаси, а также при дефиците компонентов комплемента, агаммаглобулинемиях и гипоглобулинемиях.

Анализ фагоцитарной активности лейкоцитов относится к иммунологическим методам исследования. Его показатели позволяют определить резервные способности клеток крови к поглощению и перевариванию инфекционных агентов, то есть готовность организма противостоять развитию заболевания. Если результаты анализа ниже нормы, необходимо проконсультироваться с лечащим врачом – иммунологом, инфекционистом, хирургом, ревматологом, онкологом. Физиологическое снижение показателей можно скорректировать правильным подбором физической нагрузки, профилактикой стресса.

источник

Оценка фагоцитарного звена системы иммунитета является неотъемлемым элементом оценки иммунного статуса, который нарушается при многих воспалительно-инфекционных заболеваниях. Для оценки фагоцитарного звена системы иммунитета используют исследование количества и функциональной активности нейтрофилов (реже моноцитов) крови.

Определяют:

  1. процент и общее число, морфологию нейтрофилов крови
  2. поглотительную активность нейтрофилов по поглощению частиц латекса, стафилококков, кандид
    • вычисляют фагоцитарное число (среднее число поглощенных частиц)
    • подсчитывают фагоцитарный индекс (процент нейтрофилов участвующих в фагоцитозе)
  3. метаболическую активность нейтрофилов по восстановлению нитросинего тетразолия (НСТ) в формазан
  4. хемотаксическую подвижность – по оценке подвижности к хемотаксическому веществу
  5. адгезивную активность – по прилипанию к поверхностям, а также выявляют молекулы адгезии с помощью моноклональных антител
  6. оценивают фенотип нейтрофилов – рецепторы и CD-антигены
  7. определяют переваривающую активность (фагоцитарный киллинг).

Важнейшими среди этих показателей являются поглотительная и переваривающая активность нейтрофилов, так как они прямо отражают их противоинфекционные возможности. При использовании для оценки переваривающей активности нейтрофилов бактерий трудно исследовать эту функцию. Основным методом оценки переваривания бактерий нейтрофилами является разрушение лейкоцитов, посев на питательную среду и подсчёт выросших колоний бактерий. Другой метод – оценка путём проточной цитометрии меченых бактерий или кандид. Хотя последний метод достаточно точен, но требует дорогостоящей аппаратуры, недоступной большинству лабораторий.

R. Lehrer и M. Cline заметили, что живые клетки Candida albicans не окрашиваются метиленовым синим, в то время как мёртвые клетки окрашиваются этим красителем. Это наблюдение позволило решить проблему учёта количественной характеристики киллинга дрожжевых клеток фагоцитами. В последующем J.S. Solomkin с соавторами разработали метод, позволяющий оценивать кинетику фагоцитоза, который не претерпел практически никаких изменений до наших дней, за исключением вариаций объёкта фагоцитоз, когда в качестве объекта используют, например, Saccharomices cerevisiae.

Нами разработан метод оценки активности фагоцитарного звена иммунитета, а именно, поглотительной и переваривающей активности нейтрофилов.

Все виды иммунопатологии. Первичные и вторичные иммунодефицитные болезни, аллергические и аутоиммунные заболевания.

Иммунологический мониторинг населения, проживающего в экологически неблагоприятных регионах.

Контроль за иммунотерапией заболеваний, состоянием иммунитета после противоопухолевой химио и лучевой терапии.

Разработка и проведение доклинических и клинических испытаний иммуномодуляторов.

  1. Центрифуга (1000 об /мин).
  2. Камера Горяева или Солар.
  3. Стеклянные центрифужные пробирки 10 мл (100 шт.).
  4. Термостат.
  5. Автоматические дозаторы 20 – 200 мкл.
  6. Микроскоп с иммерсионным увеличением.
  7. Предметные стёкла (50 шт.)
  1. Физиологический раствор хлорида натрия на фосфатном буфере (ФСБ) рН 7,2 или раствор Хенкса.
  2. Культура Cand >Подготовка Candida albicans

Готовят рабочую взвесь отмытых кандид (5.107 клеток в 1 мл). Оценивают жизнеспособность кандид и используют только суспензию содержащую не менее 96% живых Candida albicans. Для этого смешивают 0,05 мл суспензии кандид и 0,1 мл краски (смесь равных объемов 0,2% раствора водного эозина и 0,1% метиленового синего на дистиллированной воде), через 10 минут взвесь клеток центрифугируют при 1000 об/мин 10 минут на центрифуге ОПН-3, надосадочную жидкость отсасывают, а из осадка делают мазок, высушивают и подсчитывают при световой микроскопии 200 кандид. Оценивают процент живых, имеющих легкое розовое окрашивание и неживых, окрашенных синькой, дрожжевых клеток.

Подготовка суспензии лейкоцитов больного

Утром, натощак, берут 5-10 мл крови из вены в пробирку с гепарином (20 ед. на 1 мл крови). Кровь отстаивают в пробирке в течение 1 часа, до момента четкого отделения эритроцитов от лейкоцитов. Кончик пипетки опускают близко к осевшим эритроцитам и вращательным движением пипетки поднимают осевшие эритроциты, до окрашивания плазмы в легкий красный цвет (смесь эритроцитов с лейкоцитами предотвращает агрегацию лейкоцитов и облегчает подсчет показателей фагоцитоза) и забирают по 0,1 мл такой плазмы на каждую пробу. Количество фагоцитов в методе не стандартизируется, а берется их реальное содержание в плазме через 1 час отстаивания.

Оценка поглотительной активности нейтрофилов

Оценивают фагоцитарный индекс (ФИ), фагоцитарное число (ФЧ) и киллинг в % убитых клеток через 30 и 60 минут инкубации. Все пробы дублируют. В каждую пробирку вносят 0,1 мл плазмы исследуемого пациента и добавляют 0,05 мл рабочей взвеси кандид. Пробы инкубируют в термостате 30 и 60 минут при 37С. Затем взвесь клеток центрифугируют 5 минут при 1000 об/мин, отсасывают 0,05 мл надосадочной жидкости, осадок аккуратно ресуспензируют и наносят 0,05 мл в виде капли на край предметного стекла. Затем отполированным краем второго предметного стекла размазывают каплю по стеклу, делая тонкий мазок, высушивают, фиксируют спиртом и окрашивают азур-эозином (по Романовскому) в течение 5-10 минут.

Вычисляют фагоцитарный индекс Гамбургера, для этого при световой микроскопии, под иммерсией подсчитывают процент фагоцитов имеющих поглощённые кандиды.

Находят фагоцитарное число Райта (среднее число фагоцитированных кандид на один фагоцит): подсчитывают количество кандид в этих фагоцитах и делят на количество этих фагоцитов. При исследовании этих показателей оценивают 200 нейтрофилов.

Оценка киллинга кандид нейтрофилами

К 0,05 мл взвеси клеток оставшихся в пробирке добавляют 0,2 мл дистиллированной воды для лизиса клеток крови. Затем, добавляют 0,5 мл краски (смесь равных объемов 0,2% раствора водного эозина и 0,1% метиленового синего на дистиллированной воде) для окрашивания убитых фагоцитами кандид на 10 мин. Далее взвесь клеток центрифугируют при 1000 об/мин 10 минут, надосадочную жидкость отсасывают, а из осадка делают мазок, высушивают и подсчитывают при световой микроскопии процент убитых фагоцитами, окрашенных синькой, дрожжевых клеток. Живые кандиды имеют лёгкое розоватое окрашивание. Оценивают 200 кандид.

Исследование двух показателей фагоцитарного звена системы иммунитета у 30 здоровых людей (доноров) показало, что после 30 минутной инкубации фагоцитарный индекс составил 74,6+-10,3%; фагоцитарное число — 2,7+-0,35; киллинг — 26,3+-4,1%.

В соответствии с этим в норме показатели фагоцитарного звена системы иммунитета с использованием Candida albicans следующие:

  • фагоцитарный индекс 65-85% (74,6+-10,3%)
  • фагоцитарное число 2,5-3,0 (2,7+-0,35)
  • киллинг 22-30% (26,3+-4,1).

Исследование этих показателей в динамике позволяет оценить скорость лизиса поглощённых клеток. Повышение фагоцитарного индекса и фагоцитарного числа при сохранённом киллинге указывает на дефицит переваривания дрожжевых клеток. Уменьшение фагоцитарного индекса и фагоцитарного числа через 30 минут указывает на дефицит поглощения. Уменьшение фагоцитарного индекса и фагоцитарного числа может наблюдаться через 60 мину при интенсивном лизисе дрожжевых клеток.

Примечателен факт высокой точности предлагаемого нами метода оценки показателей фагоцитарного звена системы иммунитета. При сравнении результатов полученных нашим методом (фагоцитарный индекс нейтрофилов цельной крови после 30 минутной инкубации 74,6+-10,3%) и результатов с использованием проточного цитофлюориметра (фагоцитарный индекс нейтрофилов цельной крови доноров после 30 минутной инкубации 75+-10%) [4] отмечено абсолютное сходство.

источник

Демонстрация мазков с микробным фагоцитозом нейтрофилов. Подсчет фагоцитарного числа и фагоцитарного индекса.

Определение фагоцитарной способности лейкоцитов периферической крови производят по методике Кост и Стенко. В видалевскую пробирку берут 1 капилляр (от прибора Панченкова) раствор 0,5% лимоннокислого натрия и 2 капилляра крови из пальца. Этим же капилляром приливают 1 капилляр однодневной культуры штамма золотистого стафилококка в 2-миллиардном разведении, тщательно перемешивают и ставят в термостат на 30 минут при температуре 37 градусов Цельсия (за это время термостат не открывать!).

Взяв через 30 минут из термостата пробирку делают обычным способом мазок, быстро высушивают на воздухе, фиксируют и красят.

Подсчет микробов производят следующим способом: на 100 сегментоядерных нейтрофильных клеток подсчитывают отдельно в каждой клетке количество фагоцитированных микробов и распределение фагоцитирующих клеток. Записывается следующим образом:

число микробов в клетке от 0 до 5 число клеток
. от 6 до 10
. от 11 до 20
. от 21 до 40
. от 41 и выше
Фагоцитарный индекс (ФИ) — всего фагоцитирующих клеток на 100 нейтрофилов.
Всего фагоцитировано микробов на 100 нейтрофилов
Среднее число фагоцитированных микробов на 1 фагоцитирующую клетку (Фагоцитарное число)

Работа с картой оценки Т- и В-системы иммунитета у человека.

ОЦЕНКА Т-СИСТЕМЫ ИММУНИТЕТА (КЛЕТОЧНЫЙ ИММУНИТЕТ).

Т- лимфоциты — это клетки-регуляторы, которые действуют как рубильники: включают и выключают действие иммунной системы. Команды они отдают, выделяя сигнальные молекулы, которые называются цитакинами. Эти молекулы переносят сигналы от Т-лимфоцитов к другим клеткам. B-лимфоциты вырабатывают специальные белки — антитела.

Антитела — это специальные белки, которые с удивительной точностью — как ключ, подогнанный к замку, — узнают тот субстрат, против которого они направлены. Антигены — это белки или фрагменты белков, несущие признаки чужеродности и вызывающие иммунный ответ при введении в организм. Все клетки иммунной системы — и Т-лимфоциты, и В-лимфоциты, и макрофаги — обладают способностью очень быстро мигрировать по всему организму. Лучше всего передвигаются Т-лимфоциты и вспомогательные клетки, несколько хуже — В-лимфоциты.

Для оценки Т-системы иммунитета пользуются следующими методами:

1.Метод «спонтанных» розеток (розеткообразование с эритроцитами барана) — определяют количество Т-лимфоцитов в крови.

2. Реакция бласттрансформации лимфоцитов in vitro под влиянием ФГА или в микст культуре.

3. Определение динамики бласттрансформации.

4.Оценка продукции лимфоцитами периферической крови гуморальных медиаторов клеточного иммунитета.

Наиболее распространен тест подавления миграции макрофагов факторов; угнетающим их миграцию (MIF), выделяемым сенсибилизированными лимфоцитами под влиянием соответствующего антигена. С помощью этого метода in vitro можно установить сенсибилизацию организма к тому или иному антигену.

5. Постановка кожных реакций гиперчувствительности замедленного типа на широко распространенные антигены (туберкулезы, трихофитин). 6. Контактная аллергия к динитрохлорбензолу (ДНХБ). Этот гаптен при накожной аппликации вызывает развитие реакции гиперчувствительности замедленного типа. Повторное нанесение препарата дает типичную кожную реакцию. Поскольку вероятность контакта индивидуума с данными редкими химическими соединениями ничтожна, проба ДНХБ служит весьма распространенным методом оценки способности организма развить гиперчувствительность замедленного типа, т.е. функциональной активности Т-системы иммунитета.

7. Отторжение аллогенного кожного лоскута. Эта реакция тоже относится к гиперчувствительности замедленного типа и осуществляется в основном Т-лимфоцитами. Однако трансплантация чужеродной ткани приводит к сенсибилизированному организму по отношению к трансплантационным агентам, что может оказаться нежелательным при последующем лечении больного такими методами, как пересадка костного мозга, вилочковой железы и др.

8. Биопсия лимфатических узлов и гистологическая оценка тимус-зависимых областей вилочковой железы. Эти тесты ставятся в сложных для диагностики случаях при подозрении на комбинированные иммунодефициты и злокачественные образования.

ОЦЕНКА В-СИСТЕМЫ ИММУНИТЕТА

(ГУМОРАЛЬНЫЙ ИММУНИТЕТ).

Гуморальный иммунный ответ обеспечивается антителами, или иммуноглобинами. У человека различают 5 основных классов иммуноглобинов: IgA, IgG, IgM, IgE, IgD. Все они имеют как общие, так и специфические детерминанты.

Иммуноглобины класса G.У человека являются наиболее важными. Концентрация их достигает 9-18 г/л. Иммуноглобины этого класса обеспечивают противоинфекционную защиту, связывают токсины, усиливают фагоцитарную активность, активируют систему комплемента, вызывают аглютинацию бактерий и вирусов, они способны переходить через плаценту, обеспечивая новорожденному так называемый пассивный иммунитет.

Иммуноглобины класса А. Делят на 2 разновидности: сывороточные и секреторные. Первые из них находятся в крови, вторые – в различных секретах. Соответственно этому сывороточный иммуноглобин А принимает участие в общем, иммунитете, а секреторный обеспечивает местный иммунитете, создавая барьер на пути проникновения инфекций и токсинов в организм.

Секреторный находится в наружных секретах – в слюне, слизи трахеобронхиального дерева, мочеполовых путей, молоке. Молекулы иммуноглобина А, присутствующие во внутренних секретах и жидкостях, существенно отличаются от молекул наружных секретов. Секреторный компонент, по всей видимости, образуется в эпителиальных клетках и в дальнейшем присоединяется к молекуле IgA.

IgA нейтрализует токсины и вызывает аглютинацию микроорганизмов и вирусов. Концентрация сывороточных IgA колеблется от 1,5 до 4 г/л.

Содержание IgA резко возрастает при заболеваниях верхних дыхательных путей, пневмониях, инфекционных заболеваниях желудочно-кишечного тракта и др.

Иммуноглобины класса Е.Принимают участие в нейтрализации токсинов, опсонизации, аглютинации и бактериолизисе, осуществляемом комплементом. К этому классу также относятся некоторые природные антитела, например к чужеродным эритроцитам. Содержание IgE повышается при инфекционных заболеваниях у взрослых и детей.

Иммуноглобины класса D.Представляют собой антитела, локализующиеся в мембране плазматических клеток, в сыворотке их концентрация невелика. Значение IgD пока не выяснено, предполагают, что они участвуют в аутоиммунных процессах.

Для оценки В-системы иммунитета применяется несколько методов.

1. Определение В-лимфоцитов в крови.

2. Определение в крови уровня иммуноглобулинов. Проводят определение суммарной концентрации иммуноглобулинов и количество иммуноглобулинов разных классов.

3. Определение наличия и уровня изогемагглютининов в сыворотке крови, а также естественных (нормальных) антител к широко распространенным бактериям и вирусам. В качестве антигенов можно использовать кишечную палочку, стафилококковые токсины, вирус герпеса и др. Следует отметить и иметь в виду, что альфа- и бета-изогемагглютинины относятся к Jg M.

4. Стимуляция биосинтеза иммуноглобулинов В-лимфоцитами in vitro.

5. Исследование антителогенеза (первичного и вторичного ответа) после активной иммунизации несколькими убитыми вакцинам .Применяют коклюшную и убитую полиомиелитную вакцины, дифтерийный и столбнячный анатоксин, полисахаридные антигены, выделенные из пневмококков, менингококков и бактерий кишечной группы.

6. Исследование катаболизма иммуноглобулинов в организме. В кровь вводят меченый препарат человеческого иммуноглобулина.

7. Биопсия лимфатических узлов, костного мозга, участков слизистой оболочки кишечника. Эту процедуру проводят с целью гистологического обнаружения плазматических клеток, наличие и структуры лимфоидных фолликулов.

8. Кожные реакции, выявляющие гиперчувствительность немедленного типа. К таким пробам относятся ШИК-реакция и другие.

Определение групп крови.

Для проведения определения групп крови требуются:

1. Стандартные сыворотки I, II, III, IV групп.

2. Кровь, групповую принадлежность которой мы будем определять.

3. Предметное стекло для размещения капель сывороток.

4. Стеклянные лопаточки для перемешивания.

5. Раствор NaCl 0,9% (физиологический раствор).

На предметное стекло помещают отдельно (не смешивая) по капле стандартной сыворотки I, II и III групп. Потом добавляют к каждой капле 2-3 капли крови, групповую принадлежность которой мы хотим определить. Внимание! Ни в коем случае нельзя допустить попадания одной сыворотки к другой, иначе результат будет недостоверен, поэтому перемешивание крови и сыворотки надо производить чистыми стеклянными лопаточками (новой для каждой капли).

Через 2-4 минуты добавляем к каждой капле 1-3 капли раствора NaCl 0,9% для лучшей оценки.

Агглютинация наступила, если заметны невооруженным глазом эритроциты, склеившиеся между собой в виде комочков.

Принцип определения группы крови.

Стандартная сыворотка Группа
I II III IV крови
1 группа
+ + 2 группа
+ + 3 группа
+ + + 4 группа

Примечание: “ + “ — видна агглютинация (склеившиеся эритроциты)

В случае, если во всех трех каплях видна агглютинация, то добавляем каплю стандартной сыворотки IV группы, добавляем к ней 2-3 капли крови и через 2-3 минуты — 1-3 капли физиологического раствора. При отсутствии агглютинации можно предполагать, что кровь IV группы, если агглютинация есть — сменить набор сывороток — определение неверно.

В практике используют одновременно 2 набора стандартных сывороток одновременно, чтобы избежать случайных неправильных результатов при некачественных сыворотках.

Определение резус-фактора.

1. Стандартная антирезус сыворотка.

2. Контрольная сыворотка (не имеет резус-антител).

3. Кровь, наличие или отсутствие резус-фактора в которой мы хотим определить.

4. Физиологический раствор.

6. Стеклянные палочки для размешивания.

На предметном стекле делаем пометку К (Контроль) и Rh (резус фактор). Рядом с К капаем 4-6 капель контрольной сыворотки, а рядом с Rh — 4-6 капель стандартной антирезус-сыворотки так, чтобы они не смешивались.

Контроль Антирезус-сыворотка Резус фактор
+ Положительный
Отрицательный
+ не имеет значения Не верно определено

Примечание: “ — “ — Отсутствие агглютинации

Рядом с каждой каплей сывороток капаем 2-3 капли крови.

Смешиваем контрольную сыворотку с кровью (обязательно первой, чтобы контроль был чист!), затем — стандартную сыворотку с кровью. К каждой капле добавляем 1-2 капли физиологического раствора — для лучшего определения.

Покачивая предметное стекло, определяем наличие или отсутствие агглютинации.

По результатам исследования делаем вывод.

Механическое удерживание земляных масс: Механическое удерживание земляных масс на склоне обеспечивают контрфорсными сооружениями различных конструкций.

Организация стока поверхностных вод: Наибольшее количество влаги на земном шаре испаряется с поверхности морей и океанов (88‰).

Опора деревянной одностоечной и способы укрепление угловых опор: Опоры ВЛ — конструкции, предназначен­ные для поддерживания проводов на необходимой высоте над землей, водой.

источник



Источник: art-mylife.ru


Добавить комментарий