Анализа крови на антитела вируса бешенства

Анализа крови на антитела вируса бешенства

Далеко не каждый человек знает, как себя правильно вести после укуса животного. Некоторые отмахиваются от этой ситуации. Но промедление может стоить человеку жизни. Такое заболевание, как бешенство, не лечится. Однако спасти себя можно, вовремя проведя вакцинацию. Если взрослого или ребенка укусило животное, нужно узнать, как и где сдать анализ на бешенство у человека. Это будет подробно рассмотрено далее.

Анализ крови на бешенство у человека является практически единственным способом вовремя распознать наличие болезни в организме. Чтобы понимать, насколько серьезными могут быть последствия, нужно рассмотреть особенности этого заболевания. Бешенством называется недуг, вызванный вирусной инфекцией. Она поражает головной, спинной мозг. Без своевременного лечения болезнь приводит к смерти.

Бешенству подвержены все млекопитающие в природе. Вирус передается от одного организма к другому через биологические жидкости. Чаще всего это слюна. Люди в большинстве случаев заражаются вирусом в момент укуса животного. По статистике, чаще всего это бывают собаки, кошки, еноты, кролики, ежи, лисы, летучие мыши и т. д. Практически любое дикое или домашнее животное может быть носителем вируса.

Анализ на бешенство у человека после укуса позволяет выявить вирус еще до появления характерных симптомов. Стоит отметить, что даже если животное не имеет признаков бешенства, это еще не значит, что оно не является носителем инфекции. На первой стадии у него появляется усиленное слюноотделение. При этом появляется четкая боязнь воды. Настроение быстро меняется от угнетенного до агрессивного.

По статистике, в мире ежегодно от этого недуга погибает 55 тыс. человек. В нашей стране за последние 8 лет от бешенства умерло 75 человек. Проблема в том, что заболевание не поддается никакому лечению. Если не были предприняты меры сразу после укуса, смерть неизбежна. Даже при попадании слюны больного животного на слизистые оболочки вирус начинает развиваться в организме.

Есть ли анализ на бешенство у человека? Это довольно сложная диагностическая процедура, которая должна быть дифференцирована от других заболеваний. В Московской области, по статистике, основными носителями вируса являются дикие ежи и лисы. Заражение происходит в момент укуса человека, который собирает ягоды или грибы в лесу, а также людей на пикнике. Часто такие звери заражают бродячих собак или домашний скот. Уже от них вирус может передаваться человеку.

В 60 % случаев человек заражается от собак. Гораздо реже вирус передается от кошек (10 % случаев). В 24 % случаев бешенством заражаются из-за укуса лисы. Причем животное может выглядеть нормальным. Оно становится заразным за 3-10 дней до появления первых признаков бешенства.

После попадания в организм вирус стремительно распространяется по нервным стволам, достигая центральной нервной системы. Далее он по тем же путям попадает в периферийные участки. В результате поражается вся нервная система. Вирус по нервным стволам попадает и в слюнные железы, начиная выделяться со слюной. Скорость, с которой он продвигается в организме, составляет около 3 мм/ч.

Активно размножаясь в нервных тканях, вирус вызывает их отек, некротические изменения и кровотечения. Симптомы появляются постепенно. При появлении первых признаков бешенства у человека остается максимум 20 дней до наступления летального исхода. При этом в таком состоянии повлиять на болезнь нельзя. Это необратимый процесс. Только пока болезнь не успела достигнуть центральной нервной системы, ее можно победить путем введения специальных препаратов.

Анализ на бешенство у человека после укуса собаки или иного животного нужно сдать как можно раньше. Однако порой приходится предпринимать срочные меры до того, как будут получены результаты теста. Это заболевание не терпит промедления. Инкубационный период составляет от 30 дней до 3 месяцев. Причем этот процесс индивидуален. Известны случаи, когда инкубационный период длился всего 12 дней или растягивался до 1 года. Это зависит от места укуса или попадания вируса в организм.

Болезнь протекает в 3 стадии. На каждой из них появляются определенные симптомы. Первая стадия называется депрессией. В области укуса появляется жжение, зуд, боли, хотя рана может уже даже зажить. Иногда в этом месте возникает новое воспаление. Температура тела поднимается до 37,2 ºС. При этом появляются первые признаки психических нарушений. Человек чувствует страх, тревогу, тоску. Он замкнут, плохо спит. Эта стадия длится всего до 3 дней. Затем недуг переходит в стадию возбуждения.

На втором этапе протекания болезни появляется повышенная возбудимость и страх воды. При попытках пить глотательные мышцы болезненно сокращаются, наступает приступ удушья. Страх постоянно усиливается. В результате даже при упоминании о воде человек чувствует приступ спазма дыхательных и глотательных мышц.

На этой стадии человек остро реагирует на любой возбудитель. Даже из-за дуновения воздуха в лицо могут начаться судороги. Зрачки при этом расширены. Наблюдается сильное слюно- и потоотделение. На пике приступа человек чувствует ярость, агрессию, пытаясь навредить окружающим. Развиваются галлюцинации. Иногда наступает остановка дыхания и сердца. В промежутках между приступами сознание проясняется. Этот период длится 2-3 дня. Если за это время во время приступа не наступила смерть, бешенство переходит в третью стадию.

На этом этапе наступают параличи. Это говорит о необратимых изменениях в коре головного мозга, подкорковых образованиях. Наступает снижение двигательной и чувствительной функции. Раньше этот период ошибочно принимали за улучшение состояния из-за прекращения судорог и прочих проявлений второй стадии. Однако это далеко не так. Температура повышается до критической отметки 42 ºС. Спустя максимум сутки смерть наступает из-за паралича дыхательного центра и сердца. Чаще всего от момента появления первых симптомов до смерти проходит всего 5-8 дней.

Сдать анализ на бешенство у человека нужно после посещения инфекциониста. Диагностика проводится комплексно. Для этого проводится забор крови, мочи и тканей, на которые попала слюна. У человека, который заболел бешенством, в крови обнаруживается лимфоцитарный лейкоцитоз. При этом наблюдается анэозинофилия. Антиген к вирусу бешенства обнаруживается в отпечатках, взятых с поверхности роговой оболочки глаз.

Если была констатирована смерть, у человека берут анализ тканей аммонового рога. Здесь при наличии вируса обнаруживают тельца Бабеша-Негри.

Стоит отметить, что при диагностике наблюдаются схожие с другими заболеваниями проявления. Нужно определить, вызвано подобное состояние бешенством или такими заболеваниями, как столбняк, истероневроз, белой горячкой, отравлением стрихнином или атропином и т. д. Есть определенные отличия у подобных состояний.

Анализ крови на бешенство у человека позволяет избежать постановки неправильного диагноза. Это позволяет спасти ему жизнь при обнаружении других заболеваний. Если же диагноз подтвердится, помочь человеку будет невозможно.

Из-за незнания многие люди поступают неправильно после укуса животным. Вместо посещения врача-инфекциониста они стремятся сдать анализы. Стоит отметить, что даже в самых известных клиниках эту процедуру не проводят. Например, не получится сдать анализ крови на бешенство у человека в «Инвитро». Здесь человеку сразу же предложат обратиться к инфекционисту.

Существует ряд частных и государственных клиник, которые проводят подобные анализы. Диагностика очень специфична. В данном случае она не позволяет сначала выявить заболевание, а потом приступить к лечению. По этой причине анализ на бешенство у человека в «Инвитро» и прочих известных лабораториях сдать не получится. Лечение назначают в любом случае, если имеет место факт укуса животным.

Стоит отметить, что хоть сдать анализ на бешенство у человека в «Инвитро» не получится, можно выполнить подобную процедуру для животного. Если этот зверь домашний, у хозяина обязательно берут номер телефона и наблюдают за состоянием животного. Также проводят специальные анализы для таких питомцев. Чаще всего наблюдать за животным, которое укусило человека, невозможно (зверь часто убегает, найти его становится невозможно).

При появлении характерных симптомов врач назначит пройти обследование. Если человек не предпринял своевременных действий после укуса или попадания слюны на слизистые, открытые раны, диагностика позволит лишь установить факт развития этого недуга в организме.

Существует несколько вариантов, где сдать анализ на бешенство человеку. После посещения инфекциониста в случае необходимости следует обратиться в частную или государственную лабораторию. При появлении первых признаков болезни врач обязательно госпитализирует больного. Здесь у него берут на обследование кровь, мочу. Также обязательно проводится биопсия кожи с поврежденного участка.

Можно также сдать анализ в частной клинике. Например, подобную диагностику проводит в Москве «СитиЛаб». Стоимость анализа крови составляет около 350-380 руб. Стоимость анализа мочи составляет 350 руб. Стоимость взятия биоматериала оплачивается отдельно.

Также выявить вирус при появлении симптомов врачи могут при исследовании кожи, которая берется с затылка больного, из слезной, слюнной, спинномозговой жидкости.

Общий анализ крови позволяет исключить повышенный уровень СОЭ и лейкоцитарной формулы. Также определяются антитела, которые вырабатываются иммунитетом больного человека к возбудителю инфекции.

Могут быть взяты отпечатки с роговицы глаза. Одним из основных методов диагностики является проведение анализа ПЦР на исследование генетического материала вируса. При помощи электронной микроскопии исследуются ткани мозга.

Существуют и другие методы, которые применяются современной медициной при диагностике бешенства. Так, например, может быть назначена электроэнцефалограмма (ЭЭГ). Это позволяет оценить работу головного мозга, определить определенные отклонения в электрических потенциалах.

Анализ на бешенство у человека после укуса кошки, собаки или иного животного проводится в течение 7 рабочих дней. При этом правильный результат можно получить только после инкубационного периода заболевания. Поэтому нужно знать, как вести себя после укуса. Если такая неприятность произошла со взрослым или ребенком, нужно промыть рану проточной водой и обработать ее антисептиком.

Далее на поврежденную поверхность накладывается стерильная повязка. Пострадавший человек должен обратиться в больницу. Его осматривает инфекционист или травматолог. В этот же день пациенту вводится вакцина, которая способствует созданию иммунитета против бешенства. Пока вирус не успел проникнуть далеко, это позволяет эффективно бороться с ним.

Если животное, укусившее человека, домашнее, его наблюдают в течение 10 дней. При этом продолжается проведение вакцинирования. Препарат вводят каждому пациенту, который обратился за помощью к врачу, даже если травма произошла месяц или несколько месяцев назад.

Прежде чем будет сделан анализ на вирус бешенства у человека, проводится вакцинация. Препарат должен вводиться в соответствии с установленными правилами. Это позволяет сформировать иммунитет, предотвратив развитие болезни. Вакцина вводится в день обращения пациента к врачу, а затем на 3-й и 7-й день после контакта с животным. Если в течение 10 дней у домашнего питомца или дикого зверя не появились признаки бешенства, были проведены соответствующие анализы, которые не подтвердили наличие вируса в слюне, вакцинация прекращается.

Если наблюдение за животным невозможно или были выявлены признаки его инфицирования, вакцину продолжают вводить на 14-й, 30-й, 90-й день после контакта.

Кроме этого в место укуса вводят антитела, которые позволяют максимально быстро побороть вирус непосредственно в месте укуса. Этот метод применяется в первые часы после происшествия. Вещество нужно ввести не позднее, чем через 7 суток после контакта с животным.

Анализ на бешенство у человека не позволяет эффективно бороться недугом. Поэтому его проводят только в крайних случаях (при появлении характерных симптомов). Нужно знать, что есть люди, которые входят в группу риска. Для них обязательно проводится вакцинация раз в год.

Такие меры необходимо предпринимать жителям сельской местности, у которых есть непривитые животные. В группу риска попадают люди, путешествующие по развивающимся странам или просто выезжающие часто на природу, контактирующие с дикими зверями. К этой категории относятся охотники, звероловы, ветеринары, а также работники питомников и зоопарков. Вакцинацию проходят медицинские сотрудники, которые работают с вирусом в лаборатории.

Чтобы не потребовалось делать анализ на бешенство у человека или проходить вакцинацию, нужно придерживаться элементарных правил безопасности. Выезжая на природу с детьми, нужно объяснить малышам, как опасны могут быть дикие звери. Нужно отучить ребенка гладить бездомных котов и собак, прочих животных.

Если в доме живут коты, их не выпускают на улицу, чтобы избежать случайного заражения. Собак, которых выгуливают на улице, обязательно вакцинируют по всем правилам. Даже если человека укусило знакомое домашнее животное, нужно обратиться к врачу.

Рассмотрев особенности проведения анализа на бешенство у человека, можно понять, как правильно действовать после укуса или попадания слюны на слизистые. Это позволит избежать серьезных последствий.

источник

Компания «Удачный полёт» оказывает содействие в получении результата теста на наличие антител к бешенству.

Название документа

Особые условия

Содействие в получении ветеринарного свидетельства формы №1, №4

в зависимости от сложности ситуации

40 00 рублей на одно животное

Содействие в обмене ветеринарного свидетельства формы №1 на международный сертификат формы №5а

в зависимости от количества животных

от 6000 рублей

Содействие в оформлении ветеринарного паспорта

при перемещении за пределы РФ, только в связке с получением ветсвидетельства формы №1

25 00 рублей

Содействие в получении результатов теста на наличие антител к бешенству

в зависимости от срочности получения результатов

от 140 00 рублей

Евросертификат, сертификат на ввоз в другие страны

в страны, требующие данный сертификат

2000 рублей

Содействие в получении разрешения на ввоз животного в разные страны

в страны, требующие данное разрешение

Стоимость требует уточнения в зависимости от страны ввоза

Содействие в получении разрешения на вывоз и ввоз животных из / в Россию

требуется при перевозке CARGO

20 00 рублей

Здравствуйте дорогой читатель. В этой статье нам бы хотелось рассказать Вам подробнее, что такое тест на наличие антител к вирусу бешенства, в каких случая он требуется, когда и где его нужно сдавать, сколько стоит и иные подробности. Итак, обо всё по порядку:

1. Некоторые страны, и в особенности страны Ближнего Востока, имеют обязательное требование наличие данного анализа при ввозе собак и кошек в их страну. К этим странам относятся Южная Корея, ОАЭ, ЮАР, Малайзия, Израиль, Великобритания и прочие государства. Собственно говоря, для чего они это делают, если у всех ввозимых животных есть в наличии ветеринарные паспорта, в которых указано, что ввозимые кошки и собаки привиты от бешенства и пройден срок инкубации? Делают они потому, что наша страна входит, по их мнению, в ряд стран с эпидемиологически опасными регионами по бешенству. Правда тут резонен вопрос — почему другие государства, к примеру США и страны Европы, так не считаю? Ответ, дорогой читатель, мы предлагаем Вам додумать самостоятельно.

Правда, справедливости ради, стоит отметить, что есть страны (например Южная Корея), которые позволяют ввозить собак и кошек, если их возраст ещё не достиг положенного возраста для вакцинации против бешенства, равный 3-ём месяцем. Правда тут сразу возникает иная сложность уже в России, где сейчас уже невозможно получить ветеринарное свидетельство №1 с формулировкой «Не привит по возраст». Подробнее об этой теме мы писали в этой статье: Читать.

2. Когда же позволительно сдавать тест на наличие антител к бешенству? Ответ кроется в самом вопросе — когда в крови Вашей собаки или кошки уже сумели выработаться антитела к данной вирусной болезни и срок этот равен от 30-ти дней после самой проведённой вакцинации, а также если от даты сделанной прививки прошло не более 1-го года.

3. Анализ на наличие антител к бешенству считается успешным, если их наличие в крови животного не менее 0,05 МЕ/мл ( IU / ml ) . Если данный показатель меньше указанных цифр, то даже не стоит пытаться отправлять животное в страну импортёр с таким результатом. В противном случае Вашу собаку или кошку в лучшем случае вышлют из страны обратно, в менее лучшем случае животное привьют от бешенства ещё раз и посадят на карантин в 30-ть дней с выставлением, в конце прохождения инкубационного периода, весьма круглую сумму для оплаты услуг содержания животного на карантине. Ну и, при самом негативном сценарии, животное просто подлежит усыплению.

4. Где же можно сдать анализ на наличие антител к бешенству? К сожалению надо констатировать, что лабораторий, аккредитованных проводить подобный тест, совсем немного:

а) Федеральный центр охраны здоровья животных в г. Владимир;

б) Центр молекулярной диагностики ФГБУ «ВГНКИ» в г. Москва;

в) НИИ диагностики и профилактики болезней человека и животных в г. Москва.

5. Стоимость анализа на наличие антител к бешенству зависит от выбранной лаборатории, а также от срочности его выполнения. Так, для ориентира, на момент написания статьи (01/10/2016), сроки и стоимость в лаборатории ВГНКИ следующая:

а) Срок изготовления течении 2-ух недель — 5000 рублей;

б) Срок изготовления течении 3-ёх рабочих дней — 10 000 рублей.

Уважаемый читатель, если Вы проживаете далеко, от указанных выше городов, регионе, а также если просто нуждаетесь в содействии при получении результата теста на наличие в крови Вашей собаки или кошке антител к вирусу бешенства, то Вы можете обратиться к нам за помощью, воспользовавшись наиболее удобным для Вас способом связи в разделе КОНТАКТЫ

источник

Анализ на бешенство у собак подразумевает проведение специальных экспресс-тестов на наличие в крови специфических антирабических антител. Иногда его применяют в комплексной диагностике при подозрении на заражение домашних питомцев вирусом бешенства. Данное заболевание представляет угрозу для жизни животных, человека, поэтому заводчики собак должны иметь понятие о том, как проявляется данный недуг. Если есть подозрение на заражение, если питомец имел контакт с возможным бактерионосителем, нужно сразу отвезти питомца в ветлечебницу, для проведения лабораторной диагностики, без которой невозможно установить точный диагноз.

Бешенство (rabies) – остропротекающее заболевание теплокровных животных инфекционной этиологии, вызываемое вирусом, который поражает ЦНС, провоцируя серьезные нарушения в организме. К сожалению, эффективного лечения на данный момент не разработано, поэтому инфекция всегда заканчивается летальным исходом.

Возбудитель инфекционного недуга – РНК-содержащий вирус (рабдовирус). Поражает домашних и диких животных. Существует так называемый «природный» вирус и «лабораторный».

ВАЖНО! БЕШЕНСТВО ОТНОСЯТ К ЗООАНТРОПОЗООНОЗНЫМ БОЛЕЗНЯМ, ТО ЕСТЬ ИНФЕКЦИЯ ПЕРЕДАЕТСЯ ЧЕЛОВЕКУ. ВСПЫШКИ ИНФЕКЦИИ ОТМЕЧАЮТ ВЕЗДЕ. БОЛЕЗНЬ ИМЕЕТ ПРИРОДНО-ОЧАГОВЫЙ ХАРАКТЕР.

Природным резервуаром рабдовируса являются инфицированные плотоядные хищники. Смертельно опасный вирус содержится в слюне инфицированных особей. Инфицирование происходит контактным путем, при укусах, проникновении слюны в ссадины, ранки на дерме.

Проникнув в организм, вирус по нервным путям мгновенно перемещается в головной, спинной мозг, слюнные железы, где в дальнейшем он размножается.

В слюне инфицированных животных рабдовирус появляется примерно за три-семь дней до момента проявления первых симптомов. При этом инфицированная особь уже является вирусуносителем, представляя реальную угрозу для человека, других домашних животных. Поэтому заражение бешенством может произойти даже в том случае, если вас или вашего питомца укусило внешне здоровое животное.

Инкубационный период длиться от 2-7-ми суток до нескольких недель. Интенсивность проявления симптоматики зависит от возраста, резистентности, иммунной защиты, вирулентности, концентрации рабдовируса в организме. Смертельно опасный недуг у животных протекает в тихой, буйной, реже в атипической формах.

У собак отмечают преимущественно буйную форму инфекции, продолжительность которой составляет от шести до десяти суток. Имеет три стадии проявлении:

  • Продромальную. Срок протекания меланхолической стадии — не более двух суток. На этом этапе развития инфекции отмечают изменение поведенческих манер собаки. Животные сильно угнетены, выглядят подавленными, прячутся в темных укромных местах, неохотно идут на контакт, неадекватно реагируют на раздражители.
  • Маниакальную (стадия возбуждения). Продолжительность течения не более трех-четырех суток. Больные животные проявляют беспричинную агрессию к своим собратьям, другим домашним питомцам, человеку, включая хозяина. Агрессия сменяется ласковым поведением. Питомец требует внимания, лижет руки, лицо человека. Больные питомцы поедают несъедобные предметы. Нередко собаки убегают из дома и могут пробежать без устали 20-30 км.
  • Паралитическую (депрессивную). Для данной стадии, продолжительность которой составляет не более шести суток, характерны тяжелые сбои в функционировании ЦНС. Отмечают паралич глотки, гортани, мышечные судороги, спазмы. Нижняя челюсть отвисает. Отсутствует глотательный рефлекс. Из пасти постоянно течет слюна. Громкие звуки, шум воды вызывает сильнейшую панику. Координация движения нарушена. Питомец впадает в кому, погибает от истощения, нарушения дыхательной, сердечной функции.

Стоит отметить, что бешеная собака, независимо от формы и стадии заболевания кусает человека, животных не предупреждая о нападении лаем.

Для тихой формы болезни характерно отсутствие стадии возбуждения. Продолжительность — от двух до пяти суток. Характеризуется общим угнетением, меланхоличностью, отсутствием реакции на внешние раздражители. Животные гибнут из-за паралича мышечных структур тела, глотки. Болезнь всегда заканчивается летальным исходом.

Реже у собак отмечают атипичную форму болезни, которая проявляется нетипичными, нехарактерными для данной инфекции проявлениями. Протекает остро, подостро, реже хронически (два-три месяца). У животных отмечают изменение поведения, сбои в работе ЦНС, ЖКТ.

Заметив нехарактерное поведение своего домашнего любимца, изменение повадок, проявление агрессии, а также если собака имела контакт или была укушена бездомными, дикими животными, обязательно нужно отвезти питомца в ветлечебницу, проверить собаку на бешенство. Не стоит забывать, что симптоматика нарастает спонтанно в определенной последовательности.

При постановке предварительного диагноза должны быть учтены данные анамнеза, паталагоанатомические результаты, эпизоотологическая ситуация, симптомы. Проводится серия лабораторных, гистологических, микроскопических, бактрериологических исследований, экспресс-тесты.

Учитывая схожесть симптоматики с другими инфекциями, проводится дифференциальная диагностика (ИФА, ПЦР). Необходимо исключить болезнь Ауески, чуму плотоядных, энцефаломиелит.

Важно! Если есть подозрение на инфекцию, животное покусало человека, собаку помещают в специальные изолированные боксы и в течение десяти дней, пока не будут готовы результаты анализов, наблюдают за ее состоянием. Если диагноз подтвердился, к сожалению, проводится эвтаназия. Животных усыпляют, поскольку лечения от данной инфекции нет.

Точный диагноз удается установить только после смерти животных. Полученный патматериал исследуют различными методами.

Наиболее достоверный метод, который всегда подтверждает болезнь – микроскопические исследования биоматериала на наличие специфических включений в мозге – телец Бабеша-Негри. Расположеные в аммоновых рогах.

Для обнаружения специфического антигена в мозге применяют реакцию диффузной преципитации, иммунофлуоресцентный анализ отпечатка роговицы.

Иммунофлуоресцентный метод позволяет максимально быстро диагностировать наличие вируса в организме собак. Метод определяет вирусный антиген в 93-97% случаях.

Учитывая то, что вирус перемещается по нервным стволам, его крайне редко удается определить в кровеносном русле. Как правило, при подозрении на заражение для анализов исследуют спинномозговую жидкость.

Серологические исследования заключаются в проведении общего, биохимического анализа крови. Отмечают изменение лейкоцитарной формулы (лейкоцитоз), олигурию, альбуминурию, глюкозурию, увеличение концентрации моноцитов.

Протестировать своего питомца на бешенство, определить напряженность поствакцинального иммунитета позволит тест на наличие специфических антирабических антител в крови. Проводится данная процедура только в аккредитованных лабораториях, некоторых ветклиниках. Стоит отметить, что стоимость данного анализа довольно высока. Результаты после проведения процедуры будут готовы через 10-20 суток.

Сегодня проводится два вида тестов на антирабические антитела – RFFIT (тест быстрого торможения фокуса флюоресценции) и FAVN – тест флуоресцентных вируснейтрализующих антител, который определяет титр антител в МЕ/мл. Данные методики выполняют на живых культурах клеточных структур с добавлением в реакцию возбудителя инфекции. У собак берется 0.5- 1 мл сыворотки крови.

Тест проводят преимущественно в том случае, если вы хотите вывезти своего питомца заграницу. Многие страны ЕС запрещают ввозить на свою территорию не привитых от бешенства животных, а также собак, котов, у которых нет результатов по данному анализу.

Сдавать тест на антитела нужно тогда, когда в крови собаки выработаются антитела к данной инфекции. Специфический иммунитет после иммунизации формируется через месяц после прививки. С этого момента можно везти питомца в лабораторию для прохождения теста на антитела к бешенству. При этом после иммунизации, если возникает потребность в проведении данного теста, от даты прививки не должно пройти более года. Тест нужно сдать не позднее месяца до срока проведения ревакцинации.

Если титр антирабических антител составляет менее 0,50 МЕ/мл – собаку ревакцинируют. Через месяц сдается повторный анализ. На продуцирование защитных антител после иммунизации влияют некоторые факторы: порода, возраст, индивидуальные особенности организма, кратность антирабической иммунизации. Ветврачи рекомендуют проводить мониторинг титра антител у собак, кошек после вакцинации, даже в том случае, если не планируется выезд за границу.

Многие владельцы вывозят своих питомцев на дачу, на природу, в лес, на охоту. Не стоит забывать, что собаку могут покусать дикие звери, которые могут быть инфицированы или являются вирусоносителями.

Единственный способ защитить собаку от смертельно опасной инфекции – своевременно проведенная вакцинация.

В дальнейшем, в зависимости от выбранного препарата, раз год проводится ревакцинация. Некоторые вакцины формируют иммунную защиту сроком на три года. Оптимальную схему вакцинаций, ревакцинаций подберет ветврач.

источник

В современном мобильном мире люди все чаще берут домашних животных с собой в путешествия. Если знать, какие процедуры необходимо выполнить, пересечение границы с питомцем не будет обременительным.

Мы с радостью узнаем, что наши соотечественники посещают международные выставки и занимают там призовые места, а также все больше иностранных покупателей приобретают щенков у заводчиков Беларуси, тем самым признавая их племенную ценность.

Нашей клиникой был составлен и направлен запрос по вопросу необходимости наличия у владельца справки о титре антител к бешенству для ввоза домашних животных в Литву в Министерство сельского хозяйства Литвы. Ответом на наш запрос было письмо, в котором говорилось, что для ввоза животных-компаньонов на территорию Литовской Республики справка о титре антител к бешенству не нужна.

Также нашей клиникой был отправлен аналогичный запрос в Министерство сельского хозяйства и продовольствия Республики Беларусь. Оттуда пришел ответ: при некоммерческом перемещении домашних животных в страны-члены ЕС, наличие результата теста на определение титра антител к бешенству не распространяется на страны, перечисленные в Приложении II к Решению Еврокомссии (ЕС) №577/2013. Так как Республика Беларусь включена в этот список, тест на определение титра антител к бешенству не требуется при в езде в страны-члены ЕС.

Подробную информацию о правилах перемещения домашних питомцев и о комплекте документов на перевозимое животное можно узнать у ветеринарного атташе при посольстве принимающей страны.

Главным документом для перемещения домашнего питомца является ветеринарный сертификат – документ, подтверждающий, что животному вовремя были сделаны все прививки от инфекционных заболеваний, в том числе против бешенства и титр антител (напряженность иммунитета) к данному заболеванию соответствует международным нормам.

С 29 декабря 2014 года вступил в силу Регламент Европейского Парламента и Совета от 12.06.2013 №576/2013 по некоммерческому перемещению домашних питомцев, а также имплементирующий его Регламент от 28.06.2016 №577/13 (далее – Правила).

Правила оговаривают порядок перемещения домашних питомцев в одну из стран ЕС из другой страны ЕС или в одну из стран ЕС с других территорий или третьих стран. Эту практику переняли и многие другие страны, не входящие в ЕС, например, Тайвань, Япония, ОАЭ, Израиль.

ОДО «Антистресс» сообщает, что при обращении к нам с домашним питомцем Вы имеете возможность провести тест по определению титра антител к вирусу бешенства .

С этой целью нами заключен договор о сотрудничестве с Nacionalinis maisto ir veterinarijos rizikos vertinimo institutas (Литва), лабораторией, имеющей международную аккредитацию.

Для того, чтобы провести тест по определению титра антител к вирусу бешенства необходимо:

  • сделать забор крови у домашнего питомца (домашний питомец – животное: собака, кошка, хорек, грызун, кролик, птица или рептилия, которое сопровождает своего хозяина или уполномоченное лицо во время некоммерческого перемещения, за которое в течение всего некоммерческого перемещения несет ответственность владелец или уполномоченное лицо);
  • получить сыворотку крови, которую мы доставим в лабораторию;
  • дождаться результата от лаборатории, который через 7-10 дней придет на электронный адрес ветеринарного госпиталя «SQ-lap» и будет направлен Вам в электронном виде на Ваш e-mail;
  • получить результат – оригинал документа о проведении теста на имя владельца или уполномоченного лица придет по почте в течение 3 недель от даты забора крови (владелец – физическое лицо, указанное в качестве владельца в идентификационном документе (ветеринарный паспорт); уполномоченное лицо – любое физическое лицо, которое имеет от владельца разрешение в письменном виде на осуществление некоммерческого перемещения домашнего питомца от имени владельца).

Сыворотка крови доставляется в лабораторию с сопроводительной, в которой все графы заполняются без исправлений на английском и русском/белорусском языке.

Для правильного заполнения сопроводительной необходимы документы, копии которых останутся у нас для подтверждения данных:

  • паспорт владельца или уполномоченного лица;
  • международный ветеринарный паспорт домашнего животного, при этом:

» страница с данными о владельце должна быть заполнена на русском и английском;

» страница с данными о животном должна быть заполнена на русском и английском;

» должна присутствовать печать того учреждения, где был выдан ветеринарный паспорт;

» должно иметься фото животного;

» должны быть заполнены графы в разделе о вакцинации: когда проведена вакцинация, до какой даты она действительна и иметься соответствующая наклейка;

» должны иметься подпись уполномоченного ветеринарного врача, печать ветеринарного учреждения;

» запись о чипировании должна быть подтверждена соответствующей наклейкой, круглой печатью, которая одновременно захватывает наклейку от чипа и страницу ветеринарного паспорта, а также подписью ветеринарного врача;

» внимательно проверьте: дата чипирования должна предшествовать дате вакцинации от бешенства;

» на сайте http://animal-id.by/ введите номер чипа своего питомца, найдите данные о владельце и животном, проверьте, все ли указано верно, соответствуют ли данные на сайте записям в международном ветеринарном паспорте.

»Осторожно! Данные, внесенные на сайт http://animalid.by/ не попадают в Международную базу данных.

  • проводить вакцинацию от бешенства необходимо той вакциной, которая признается в стране следования. О том, где и какие вакцины признаются, необходимо узнавать самостоятельно. Данная информация имеется на официальных сайтах. Например, вакцины против бешенства Биофел и Биокан признаются только Словенией, Чехией, Румынией и некоторыми странами Европы;
  • в день вакцинации домашнему питомцу должно быть не менее 12 недель;
  • вакцина должна быть введена уполномоченным ветеринарным врачом;
  • в соответствующем разделе ветеринарного паспорта уполномоченный ветеринарный врач должен указать дату проведения вакцинации и срок ее действия;
  • дата вакцинации не должна предшествовать дате вживления идентификационного чипа, в противном случае проводится ревакцинация.

Будьте добры, проверьте правильность английского написания в сопроводительных документах имени владельца или уполномоченного лица в соответствии с паспортом и клички животного в соответствии с международным ветеринарным паспортом. Информацию, которую Вы укажете в сопроводительных документах, невозможно будет изменить в дальнейшем .

Уважаемые владельцы домашних животных, необходимо помнить, что для въезда в определенные страны тест по определению титра антител к вирусу бешенства должен соответствовать определенному международному стандарту, и, поэтому, к проведению вакцинации также предъявляются определенные требования:

Тест по определению титра антител к вирусу бешенства проводится не ранее, чем через 30 дней после последней вакцинации от бешенства, т.е. в возрасте не младше 4 месяцев. Максимальный срок забора крови на исследование – за 2 месяца до окончания срока действия вакцины.

Требования, предъявляемые к сыворотке крови животного.

Кровь берут в лицензированной ветеринарной клинике. Для получения пробы сыворотки крови проводят забор венозной крови при помощи инъекционной иглы в сухую чистую пробирку в объеме не менее 3 мл, чтобы потом получить не менее 1,3 мл сыворотки. Кровь для исследования сдается натощак.

После забора крови пробу выдерживают в течение 30 минут при 37°С для формирования сгустка крови. После этого осторожно отделяют сформировавшийся сгусток крови от стенок и помещают пробирку на 30-60 минут при 4°С. Далее, пробу центрифугируют при 1500 – 2000 оборотах в минуту. По окончании центрифугирования осторожно, не захватывая осадок, отбирают надосадочную жидкость – сыворотку крови.

На процедуру забора крови для теста к нам в ветеринарный центр клиенты приезжают с разных уголков Беларуси. Поэтому, обращаем внимание, что НЕОБХОДИМО РАСПОЛАГАТЬ ВРЕМЕНЕМ для ожидания, чтобы врач лабораторной диагностики подтвердил, что сыворотка отобрана нормально и в нужном количестве.

Не принимаются к исследованию образцы с примесью форменных элементов крови, сыворотки с осадком, мутные, с гнилостным запахом. Сыворотка крови должна быть прозрачная, с цветом от светлого до соломенно-желтого.

До отправки сыворотку крови хранят в незамороженном виде при 4°С, но не более 2 дней. Если сыворотку крови необходимо хранить более 2 дней, то ее хранят при минус 20°С. Не допускается замораживание и оттаивание сыворотки крови более 2 раз.

Для транспортировки пробирку с сывороткой крови герметично закрывают, опечатывают печатью ветеринарной клиники, где проводился отбор и приготовление образцов. Если отбирают пробы от нескольких животных, принадлежащих одному владельцу, то каждую пробу (пробирку) маркируют, указывая кличку животного. Для маркировки на пробирку наклеивают лейкопластырь и авторучкой пишут кличку животного, помещают в неповрежденный полиэтиленовый пакет, который укладывают в термос со льдом.

Метод исследования. Титр антирабических вируснейтрализующих антител в сыворотке крови животного определяют в реакции нейтрализации на культуре клеток.

Мы получаем результат исследования из лаборатории на 7-10 день по электронной почте. Далее, отправляем его на электронный адрес, указанный владельцем. Позже, к нам приходит заказное письмо из лаборатории с оригиналом ответа, и мы направляем данный ответ заказным письмом с уведомлением по адресу, указанному клиентом.

Ответэто справка о титре антител у исследованного животного международного образца сертифицированной лаборатории.

Справка действительна 1 год с возможностью ее продления до 3 лет при условии регулярной своевременной ревакцинации от бешенства.

Итак, Вы получили справку – результат теста по определению титра антител к вирусу бешенства. Далее, в посольстве той страны, куда Вы уезжаете, Вам необходимо обязательно узнать, через какой период времени после получения справки Вам с Вашим питомцем можно въезжать (в некоторых случаях это допускается не ранее, чем через 3 месяца) .

Забор крови для проведения теста по определению титра антител к вирусу бешенства проводится 1 раз в 1-2 месяца, по предварительной записи. После этого назначенная нами даты забора крови, будет сообщена Вам, а также с Вами будет согласовано время.

Одновременно, в ветеринарном госпитале «SQ-lap» по адресу

г. Минск, ул. Тимирязева, 46 можно сделать забор крови для общего и биохимического исследования и пройти другие диагностические процедуры перед дальней поездкой.

источник

Статус ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГБУ «ВНИИЗЖ»)

ФГБУ «ВНИИЗЖ» с 2000 года является диагностическим центром РФ по бешенству (Приказ № 32 Департамента ветеринарии МСХ РФ от 19.10.2000 г.). В 2009 г ФГБУ «ВНИИЗЖ» успешно прошел квалификационный тест Французского управления по безопасности пищевых продуктов (AFSSA) в Нанси, Франция и с 2010 г. имеет международную аккредитацию на право определения антител к вирусу бешенства. Ссылка на международную аккредитацию ФГБУ «ВНИИЗЖ» находится на сайте Евросоюза по адресу http://ec.europa.eu/food/animal/liveanimals/pets/approval_en.htm#russia

Сведения для владельцев животных

Для разных стран могут быть разные условия ввоза животных, которые могут меняться, поэтому владельцам необходимо самим выяснять условия ввоза животных в страну на тематических ресурсах.

Метод исследования, сроки исполнения анализа

Титр антирабических вируснейтрализующих антител в сыворотке крови животного определяют в реакции нейтрализации на культуре клеток.

Длительность анализа c оформлением результатов исследования составляет 10 рабочих дней с момента получения подтверждения оплаты исследований.

Требования, предъявляемые к сывороткам крови животных

Для определения антител к вирусу бешенства у животных используют только сыворотку крови. Кровь берут в лицензированной ветеринарной клинике / лаборатории / СББЖ не ранее чем через 30 дней после последней антирабической вакцинации.

Для получения сыворотки крови проводят забор венозной крови при помощи инъекционной иглы в сухую чистую пластиковую пробирку в объеме не менее 2 мл. Антикоагулянты не добавлять! После забора крови ее выдерживают при 37°С в течение 30 минут для формирования сгустка крови. Далее осторожно отделяют сформировавшийся сгусток крови от стенок и помещают пробирку на 4°С на 30-60 минут. После этого пробу центрифугируют при 189 – 335 g (1500 – 2000 оборотов в минуту). По окончании центрифугирования осторожно, не захватывая осадок, отбирают надосадочную жидкость – сыворотку крови. Сыворотка крови должна быть прозрачная, с цветом от светлого до соломенно-желтого. Допускается легкая степень гемолиза (розоватый цвет). Необходимый объем сыворотки крови для исследования составляет 1,0 мл.

Не принимаются к исследованию цельная кровь или образцы с примесью форменных элементов крови, сыворотки крови с сильным гемолизом (темно-красного цвета), с осадком, мутные, с гнилостным запахом.

Пробирка для сыворотки крови должна быть пластиковая, герметично закрытая, крышка дополнительно герметизирована (парафильм, скотч) промаркирована устойчивым маркером и опечатана печатью ветеринарного учреждения, в котором проводили забор крови на исследование.

Правила транспортировки образцов сыворотки крови

В зависимости от длительности транспортировки пробы необходимо направлять в замороженном либо охлажденном состоянии в термоконтейнере. Пробирку с сывороткой максимально обезопасить от проливания образца или попадания в него влаги. Для примера: использовать 2 пакета со льдом, первый положить на дно контейнера, затем положить сыворотку в пластиковой, герметично закрытой, промаркированной пробирке и завернутую в целофановый пакет, второй пакет со льдом положить сверху. К контейнеру приложить (прикрепить, например скотчем) пакет документов. Все это упаковать в тару (пакет).

До отправки в ФГБУ «ВНИИЗЖ» сыворотку крови хранят при 4°С не более 2 дней. Если сыворотку крови необходимо хранить более длительный срок, то ее помещают при минус 20°С. Замороженную сыворотку крови для отправки в ФГБУ «ВНИИЗЖ» упаковывают, как описано выше. Не допускается замораживание и оттаивание сыворотки крови более 2 раз. Если отбирают пробы от нескольких животных, принадлежащих одному владельцу, то каждую пробу (пробирку) необходимо маркировать. Посылку нужно отправить на адрес ФГБУ «ВНИИЗЖ», дополнительно указать «Пункт приема патологических материалов».

Если Вы сами не можете привезти пробу, то ее можно доставить в ФГБУ «ВНИИЗЖ» любой экспресс-почтой, которая пересылает биологический материал, по России, например, SPSR, Pony-express, Major-express, Dimex, DHL (компания работает только с юридическими лицами) и т.п. Правила упаковки пробы такие же.

Контакты, адрес, схема проезда для доставки сыворотки курьерской службой здесь: http://www.arriah.ru/main/about/contacts

Сопроводительное письмо в ФГБУ «ВНИИЗЖ»

Вместе с образцами сывороток крови направляют сопроводительное письмо (Приложение 1) для исследований на наличие антител к вирусу бешенства, заверенное подписью ветеринарного врача и печатью ветеринарной клиники, где проводился отбор образцов.

К сопроводительному письму необходимо приложить:

1. копию ветеринарного паспорта животного (страница с данными о животном и владельце, страница с последней вакцинацией против бешенства), заверенную подписью ветврача и печатью ветеринарной клиники;

2. копию российского паспорта владельца для выписывания счета на оплату (данные о владельце, адрес проживания, электронный адрес);

3. копию заграничного паспорта владельца для оформления документов на вывоз.

Если в ветеринарном паспорте в графе «владелец» написан один человек, а вывозить будет другой человек, то от владельца нужна доверенность на имя того человека, который будет вывозить животное. Доверенность нужна на границе, в ветеринарном пункте. Правила ее оформления, пожалуйста, уточняйте в посольстве той страны, в которую Вы вывозите животное. Для постановки анализа данная доверенность не нужна.

В ряде случаев у молодых и старых животных, если они прививались впервые, может оказаться, что уровень антител ниже требуемой нормы в 0,5 международных единиц/мл. Это может быть обусловлено индивидуальными, породными особенностями животного, его физиологическим состоянием на момент вакцинации, качеством вакцины. В этом случае, мы рекомендуем пройти повторную вакцинацию и провести повторный анализ. Поэтому планируйте проведение анализа не накануне вылета.

Прием материала для исследования

Сыворотку крови для исследования на антитела к вирусу бешенства передают в «Пункт приема патологических материалов» ФГБУ «ВНИИЗЖ». Время работы пункта с 8:00 до 15:30. Необходимо заключить договор на проведение исследования в коммерческом отделе ФГБУ «ВНИИЗЖ» (отдел реализации). Результаты Вам могут быть отправлены «Почтой России» или курьерской службой.

Получить консультацию по вопросам проведения исследования на антитела к вирусу бешенства можно в лаборатории бешенства и BSE по телефону 8 (4922) 26-19-88, 26-15-12, 26-17-65, добавочный 23-33, Чернышова Елена Владимировна, либо по эл. почте chernishova@arriah.ru. Всю необходимую информацию для заключения договора, получения счета и результата можно уточнить в отделе реализации по телефонам: (4922) 26-15-51, 26-15-25, Рябова Юлия, либо по эл. почте ryabova@arriah.ru .

в ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных»

референтную лабораторию по бешенству и BSE

600901, г. Владимир, мкр. Юрьевец

Направляется сыворотка крови для исследования на наличие антител к вирусу бешенства от:

пол________________________, дата рождения_________________________,

индивидуальный идентификационный номер (чип)_______________________

последняя дата вакцинации против бешенства «____» «___________» 20___г.

серия и номер______________________________________________________

дата взятия крови для анализа ________________________________________

ФИО владельца ____________________________________________________

Адрес, индекс владельца_____________________________________________

Телефон, E-mail владельца___________________________________________

Прилагаются следующие документы: 1. копия рос. паспорта владельца (стр. 2-3, 5-6);

2. копия загран. паспорта владельца (стр. с фотографией); 3. копия паспорта животного.

ФИО владельца ____________________________________________________

ФИО вет. врача ____________________________________________________

«____» «__________» 20____г. М.П.

название организации (вет. клиника / лаборатория / СББЖ), адрес, телефон

источник

Бешенство собак — заболевание, вызываемое вирусом Rabies virus. Этот вирус поражает нервные клетки и передается со слюной при укусе и через поврежденную кожу и слизистые оболочки. Особая опасность заключается в том, что бешенство опасно для всех видов домашних и диких теплокровных животных, и человека. При появлении клинических признаков летальность составляет почти 100%. От момента попадания вируса в организм до первых симптомов может пройти от нескольких дней до года. При экстренной вакцинации сразу после укуса обычно болезнь не развивается. Клинически это заболевание у собак проявляется отказом от еды, водобоязнью, агрессией или наоборот излишне ласковым поведением, затем появляются судороги и животное погибает. От момента появления первых симптомов редко проходит более 10 дней.

В соответствии с Санитарными правилами СП 3.1.096-96 и Ветеринарными правилами ВП 13.3.1103-96:

  • «5.1. Диагноз «бешенство» ставят на основании комплекса эпизоотологических, клинических, патологоанатомических данных и результатов лабораторных исследований.
  • 5.2. Для исследования на бешенство в лабораторию направляют свежий труп или голову мелких животных, а от крупных — голову или головной мозг.»
  • Микроскопическое исследование головного мозга для выявления телец Бабеша- негри.
  • Метод флюоресцирующих антител (МФА). Для этого исследуют головной мозг или роговицу. Особенность данного исследования в том, что можно провести исследование живого животного в течении всего нескольких часов. Для данного исследования животное надежно фиксируют и под местным анестетиком делают несколько мазков-отпечатков с роговицы. После чего обрабатывают стекла антирабической сывороткой меченной флюоресцирующей краской и исследуют в люминесцентном микроскопе. К сожалению, в Красноярске данный метод не проводится.
  • Биологическая проба – заражение мышей.

В связи с тем, в РФ нередко выявляются случаи заражения бешенством домашних и диких животных, то для ввоза наших животных в некоторые страны, необходимо соблюдать особые условия. Стандартным является наличие ежегодной вакцинации у чипированного животного с обязательной отметкой в паспорте. Но для стран Евросоюза, Тайваня, Японии, ОАЭ, Израиля необходимо еще и тест на количество антирабических антител в крови животного. Зачем проводится это исследование? Антитела – это специфические белки в организме животного, которые уничтожают вирусы. Дело в том, что антитела начинают вырабатываться в организме животного сразу после вакцинации, течении трех недель они повышаются, а потом постепенно снижаются. Большинство импортных производителей вакцин от бешенства гарантируют достаточно высокий уровень антител в крови животного до трех лет при соблюдении инструкции. Напряженность иммунитета(количество антител) зависит от многих факторов: общего состояния здоровья животного, скорости иммунной реакции, качества вакцины и многих других. Обычно уровень антител в крови должен быть не менее 0,5 МЕ/мл. Перед переездом нужно внимательно ознакомиться с условиями въезда в страну заранее. Важно! Исследование на уровень антител может выполнять только лаборатория, прошедшая международную аккредитацию в референс центре AFSSA в Нанси, Франция.

Список аккредитованных лабораторий:

  • г.Владимир, мкр. Юрьевец, ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГБУ «ВНИИЗЖ»)
  • г.Москва, 2-ой Рощинский проезд, д.8, стр.5, этаж 1, комнаты 2,3,18.ООО «НовиСтем»
  • Россия, Владимирская область,Петушинский район, ПГТ Вольгинский,ул. Старовского, д. 27ООО «Институт Биотехнологий Ветеринарной Медицины» («ИБВМ»)
  • ФГБУ «ВГНКИ» г. Москва, Звенигородское щоссе 5
  • г.Москва, ул. Гамалеи, д. 16, стр.2 НИИ профилактики болезней человека и животных

Для того чтобы пройти это исследование на бешенство, ваше животное должно быть:

  • старше 4 месяцев
  • чипировано
  • привито от бешенства (не ранее чем 30 дней назад и 2 месяца до окончания срока действия вакцины)

Во многих странах при ввозе животных из России необходимо ни только паспорт с своевременно поставленной вакциной, но и анализ, подтверждающий высокий титр антител. Данный анализ можно сделать в указанных выше лабораториях России. В удобное для Вас время в нашей ветклинике необходимо сдать кровь для получения сыворотки, затем мы опечатаем пробу в вакуумную пробирку и готовим сопроводительное письмо с копией ветеринарного паспорта (заполненным на английском языке) в строго вертикальном положении. Хранится кровь либо в замороженном виде, либо при температуре +4С +8С в течение 9 суток. Исследование проводится от 3 дней до 2 недель.

Далее владелец осуществляет отправку по указанным адресам и в течении недели-месяца, лаборатория присылает ответ.

Полная информация о ценах в разделе прайс-лист.
ЗАПИСАТЬСЯ НА ПРИЕМ

источник

Методы выявления антигенов. При бешенстве для экспресс-диагностики можно использовать методы флуоресцирующих антител (МФА), реакции преципитации (РП) в агаровом геле, методы иммуноферментного анализа (ИФА), полимеразной цепной реакции (ПЦР). Для прижизненной диагностики бешенства у человека требуется несколько тестов.

Определение антител к антигенам вируса бешенства. Выявление антител в сыворотке крови или в цереброспинальной жидкости — важный метод диагностики. Серологическое исследование рабиес-специфических антител проводится в сыворотке крови для определения пред- и постэкспозиционной вакцинации и определения времени бустерной иммунизации с целью повышения иммунного ответа.

Выделение вируса. Для выделения и идентификации вируса используют метод биопробы на белых мышах. Исследуемый материал суспендируют в физиологическом растворе, содержащем антибиотики и эмбриональную сыворотку крупного рогатого скота. Суспензия вводится интрацеребрально белым мышам массой 5–6 г. Для доказательства развития инфекции за мышами ежедневно наблюдают до 30-го дня после инокуляции. Мыши, у которых за этот период развивается заболевание, немедленно подвергаются эвтаназии, и ткани мозга исследуются методом прямой МФА.

Преимущество данного подхода состоит в возможности определить малые количества вируса бешенства в материале. Недостаток метода — необходимость многодневного (7–18 суток) ожидания между инокуляцией и проявлением первых признаков заболевания. Для сокращения инкубационного периода применяют мышей-сосунков. Для экспресс-диагностики можно использовать мышей в возрасте менее 3 дней: у мышей, забитых через 3 дня, уже выявляется антиген вируса в мозге, который можно выявить методом МФА.

Такой метод выделения вируса практикуется в качестве подтверждающего диагностического теста при отрицательных результатах по выявлению антигена и телец Бабеша – Негри и в случае укуса человека подозрительным на бешенство животным. Он обеспечивает надлежащую чувствительность и специфичность, т. е. расценивается на уровне диагностической значимости метода прямой иммунофлуоресценции. Кроме того, этот метод является основным для идентификации вариантов вируса и перспективен для разработки диагностических реагентов.

Выделение и идентификация вируса на культуре клеток. Основным недостатком выделения вируса при инфицировании лабораторных животных является длительность метода. Избежать этого можно при использовании культур клеток. Обычно для этих целей используют культуру клеток нейробластомы мышей, если нужно исследовать ткани головного мозга. Мозг суспендируют в культуральной питательной среде, суспензию наносят на монослой культуры клеток и инкубируют от одного до нескольких дней.

Чувствительность данной культуры к вирусу можно повысить обработкой ее ДЕАЕ декстраном. Монослой клеток затем отмывают, фиксируют на холоде ацетоном или смесью формалина с метанолом и исследуют методом иммунофлюоресценции. Если животное было инфицировано вирусом бешенства, то в монослое культуры клеток выявляются цитоплазматические включения антигена вируса бешенства.

Показано, что на клетках мышиной нейробластомы линии Na C1 300 в сочетании с МФА антиген вируса бешенства можно выявить через 2 дня. Чувствительность метода сравнима с методом изоляции вируса на мышах.

Хотя вирус бешенства обладает облигатной нейропатогенностью in vivo, он способен инфицировать широкий круг клеток-хозяев in vitro, что можно использовать для исследования других тканей и органов на наличие вируса бешенства. Установлено, что вирус бешенства размножается в клетках ВНК-21 и Vero, в первичных клетках куриных эмбрионов или почек хомяка. Показано, что адсорбция вируса и внедрение его в клетку происходят в течение 7 часов. Через 24–48 часов внутри клетки образуются новые вирусные частицы, через 72 часов происходит почкование их из клеточной оболочки в межклеточное пространство.

Для экспресс-диагностики бешенства могут быть использованы:

а) метод МФА — для выявления антигена вируса бешенства в отпечатках роговицы или заднего отдела шеи больного, содержащего луковицы волос;
б) метод ПЦР — для выявления РНК вируса в биоптатах тканей, слюне, спинномозговой или слезной жидкости;
в) метод ИФА — для выявления специфических антител (антигена) у больных с типичным или атипичным течением.
г) метод биопробы — для выделения вируса на ранних этапах заболевания или для выявления антител в крови или спинномозговой жидкости на поздних стадиях заболевания. Для экспресс-диагностики используется комплексный метод (биопроба + МФА), заключающийся в заражении исследуемым материалом 2-дневных новорожденных мышей и исследования их мозга на 3–4-е сутки в МФА.

Выбор методов прижизненной диагностики в значительной мере зависит от стадии болезни: метод, основанный на выявлении антигенов, как правило, обладает высокой чувствительностью в конце инкубационного периода, в течение первых нескольких дней заболевания, в то время как вируснейтрализующие антитела обычно появляются в спинномозговой жидкости и сыворотке крови после 7-10 дней от начала болезни.

Реакция иммунофлюоресценции. Метод основан на использовании антител, связанных с красителем, например, флюоресцеинизотиоцианатом. РИФ широко применяется для выявления вирусных антигенов в материале больных и для быстрой диагностики.

Метод обладает наиболее высокой степенью чувствительности, он положен в основу экспресс-диагностики и позволяет обнаруживать вирусные антигены в течение нескольких часов

Основные достоинство МФА: быстрота выполнения, высокая специфичность (100%). Затрачиваемое время на диагностику заболевания с его помощью — менее одного дня. Применяются прямой и непрямой варианты МФА.

Прямая иммунофлуоресценция остается наиболее предпочитаемым методом диагностики бешенства. Предметные стекла, содержащие мазки-отпечатки тканей мозга, или стекла с монослоем культуры тканей фиксируют в ацетоне в течение 1–4 часов. Затем препараты высушивают и обрабатывают флуоресцирующими поликлональными антинуклеокапсидными антителами (иммунофлуоресцентный реагент).

Этот реагент представляет собой конъюгат, приготовленный из специфических поликлональных антител IgG класса к нуклеокапсидному антигену вируса и флуоресцеина изоцианата (ФИТЦ). Специфические антитела получают путем гипериммунизации животных (кроликов, хомяков или лошадей) смесью эпитопов нуклеокапсида вируса.

В настоящее время для этих целей все шире используют мышиные моноклональные антитела к нуклеокапсиду вируса бешенства. После 30-минутной инкубации при 37° С диагностические препараты многократно отмывают физиологическим раствором и дистиллированной водой.

Антитела, меченные ФИТЦ, фиксируются только в местах локализации вирусных нуклеопротеидных антигенов. Затем препараты высушивают на воздухе и исследуют методом световой микроскопии, используя в качестве источника света ксеноновую лампу и соответствующий фильтр.

При непрямом варианте антиген сначала соединяют с неокрашенной специфической иммунной сывороткой. Затем на образовавшиеся нефлуоресцирующие комплексы антиген-антитело воздействуют меченой флуорохромом иммунной сывороткой, содержащей антитела к белкам специфической сыворотки. Непрямой вариант МФА наряду с выявлением антигена позволяет количественно определять антитела в исследуемой сыворотке путем соответствующего ее разведения.

Меченые ФИТЦ образования в клетках разных тканей выявляются в виде желто-зеленого флуоресцентного окрашивания на темном фоне (в виде округлой или овальной формы внутрицитоплазматических включений).

Иммуноферментный анализ. Метод основан на принципе сорбции белков на твердой фазе с последующим образованием комплексов антиген-антитело, выявляемых субстрат-индикаторным раствором. Добавляемый в лунки антиген специфически связывается с антителами. На слой антигена наносят исследуемые сыворотки в нужных разведениях. При наличии в них специфических антител последние связываются с антигеном. Для выявления связывания на слой антител наносят иммуноглобулин против глобулинов сыворотки людей, коньюгированный с пероксидазой хрена. Количество сорбирующего коньюгата пропорционально количеству связавшихся с антигеном антител сывороток людей. Это можно определить, используя индикаторный раствор (ортофенилилендиамин + перекись водорода), компоненты которого в результате действия пероксидазы коньюгата окрашивают жидкость в коричнево-желтый цвет. При обследовании неясных случаев применение ИФА дополнительно к методам РП или РСК позволяет увеличить достоверность лабораторной диагностики бешенства, благодаря большой чувствительности этого метода. Метод позволяет обнаруживать инфекционные и дефектные частицы.

Для определения антирабических антител в процессе вакцинации можно применять непрямой метод ИФА, используя в качестве антигена очищенный вирус, а для определения антител класса IgG в человеческой сыворотке — А-белок стафилококка, связанный с пероксидазой хрена. Результаты ИФА сравнимы с полученными в тестах вирусной нейтрализации на мышах. Метод позволяет выявлять присутствие IgМ в начале процесса иммунизации.

Иммуноферментные методы — весьма перспективны для выявления нуклеокапсидного антигена вируса при посмертной диагностике в тканях головного мозга. В их числе, например, быстрый иммуноферментный метод диагностики бешенства, основанный на приготовлении плашек сенсибилизированных антителами IgG изотипа к нуклеокапсиду первого серотипа, разведенных в карбонатном буфере.

Материал для исследования гомогенезируют в буфере или культуральной среде, осветляют центрифугированием, вносят в лунки и инкубируют в плашках. Фиксированный специфическими антителами нуклеокапсидный антиген идентифицируют добавлением пероксидазного конъюгата с антинуклеокапсидными противорабическими антителами иной видоспецифичности и хромогенного субстрата. Чувствительность метода составляет 0,8–1,0 нг/мл.

Этим методом можно выявлять антигены вирусов различных серотипов. Применение конъюгатов нуклеокапсидспецифичных антител, меченых биотином, повышает чувствительность метода до 0,1–0,2 нг/мл.

Методом ИФА успешно выявляется антиген нуклеокапсида [139], но материал, даже разложившийся, не должен фиксироваться формалином.

Метод полимеразной цепной реакции. Для экспресс-диагностики вируса бешенства и идентификации лиссавирусов наиболее удобен метод полимеразной цепной реакции (ПЦР). Метод ПЦР — самый надежный и быстрый для выделения вирионной РНК из любых проб, содержащих вирус в низкой концентрации. С его помощью можно создать много копий РНК вируса. Этот метод используется для подтверждения результатов МФА и для определения вируса в слюне, луковицах волос заднего отдела шеи и головы.

ПЦР основана на принципе естественной репликации ДНК. Суть метода заключается в многократном повторении циклов синтеза (амплификации) вирусоспецифической последовательности ДНК с помощью термостабильной Taq ДНК-полимеразы и двух специфических затравок, так называемых праймеров.

Каждый цикл состоит из трех стадий с различным температурным режимом. В каждом цикле удваивается число копий синтезируемого участка. Вновь синтезированные фрагменты ДНК служат в качестве матрицы для синтеза новых нитей в следующем цикле амплификации, что позволяет за 25–35 циклов наработать достаточное число копий выбранного участка ДНК для ее определения, как правило, с помощью электрофореза в агарозном геле.

Особенно высокая чувствительность ПЦР при использовании праймеров, комплементарных N-гену, когда удается выявлять РНК вируса в пробах, содержащих вирус в титре 10 МЛД50. Методом ПЦР можно выявлять РНК вируса даже в разложившемся патологическом материале.

В настоящее время разработаны и широко используются на практике подтверждающие (конфирматорные) тесты, такие как ПЦР в обратно-транскриптазном исполнении (ОТ-ПЦР). Метод ОТ-ПЦР — высокочувствительный и наиболее эффективный. РНК экстрагируется из тканей инфицированного вирусом органа, транскрибируется в кДНК, которая затем амплифицируется методом ПЦР. Для постановки ОТ-ПЦР необходимы праймеры, полученные к консервативным областям генома вируса бешенства. Обычно используются гены, кодирующие нуклеопротеин или N-белок.

Метод ПЦР высокоспецифичен и очень чувствителен. Является одним из наиболее точных тестов детекции рабического антигена, позволяет диагностировать бешенство даже при наличии в материале хотя бы одного вириона. В основе теста лежит комплементарное достраивание РНК-матрицы, осуществляемое in vitro с помощью фермента РНК-полимеразы. В последние годы ПЦР находит все более широкое применение для диагностики и мониторинга вирусных инфекций. Однако методика проведения сложна, дорогостояща и пока недостаточно унифицирована для рутинного применения.

Цитологические методы в настоящее время имеют ограниченное диагностическое значение, но при ряде инфекций по-прежнему должны применяться. Исследуются материалы аутопсии, биопсии, мазки, которые после соответствующей обработки окрашиваются и анализируются под микроскопом. При бешенстве — это выявление включений в цитоплазме клеток (тельца Бабеша – Негри).

Выделение вируса. Выделение вируса может быть необходимым для подтверждения результатов тестов по определению антигена и для более детальной характеристики изолятов. И хотя этот метод является одним из самых старых и трудоемких методов диагностики, сегодня выделение вируса с последующей идентификацией с помощью одного из современных методов (ИФА с моноклональными антителами или ПЦР) является наиболее достоверным методом диагностики, т. н. «золотой стандарт».

Результативность методов диагностики бешенства может варьировать в зависимости от ряда факторов (стадии болезни, сроков забора материала, качества полученных проб, условий их хранения, опытности персонала, качества реактивов и др.). Если положительный результат подтверждает бешенство, то отрицательный не всегда свидетельствует об отсутствии болезни. Поэтому при бешенстве эксперты ВОЗ рекомендуют использовать несколько тестов, особенно МФА в сочетании с биопробой на новорожденных (2–3 дневных) белых мышах.

Все работы с материалом, предположительно содержащим вирус бешенства, равно как и с животными, подозрительными на бешенство, должны проводиться с соблюдением мер личной безопасности. Медицинские работники и ветеринарные врачи должны работать в халатах, перчатках, масках.

По окончанию работы боксы обрабатывают 3% раствором перекиси водорода.

Флаконы, ампулы и инструменты, а также оставшиеся материалы, содержащие вирус бешенства, и всю посуду после работы обеззараживают автоклавированием в течение 1 часов при 1,5 атм (режим «убивки»).

Средства индивидуальной защиты обеззараживают кипячением или автоклавированием. Рабочую поверхность стола и руки обеззараживают дезраствором (0,5% раствор хлорамина).

источник



Источник: domofoniya.com


Добавить комментарий